3M Molecular Detection Assay 2 - Salmonella MDA2SAL96, 96 tests, 1 ea 取扱説明書

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（日本語）

JA

1

3

発行日：2019-05

製品情報

3M™ 分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

製品の概要および用途

3M™分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、3M™分子検出システムを用いて前培養した食品、飼料および食品・飼料製造工程環境検

体中の

サルモネラ

を迅速かつ特異的に検出するために使用します。

3M™病原菌検出アッセイは、増幅した菌を検出するために、高い特異性と感度で核酸配列を迅速に増幅するLAMP法と、生物発光

を組み合わせています。推定陽性結果はリアルタイムに表示され、陰性結果は検査が完了してから表示されます。結果が陽性と推

定される場合は、任意の別の方法または行政の規制によって指定された通りに確認する必要があります

(1,2,3)

。

3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、検査技術の訓練を受けた技術者が検査室環境で使用することを想定してます。3Mは、食品

または飲料以外の産業における本製品の使用に関しては検証しておりません。たとえば、3Mは、本製品を医薬品、化粧品、臨床ま

たは動物診断検体の検査で使用することについて検証しておりません。3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、可能性のあるすべ

ての食品や食品製造工程、検査プロトコル、あるいはすべての菌株について評価されたわけではありません。

すべての検査法と同様に、前増菌培地のメーカーや組成、品質などの要因が結果に影響する場合があります。採取方法、検査プロ

トコル、検体の調製、取り扱い、および検査手技などの要因が結果に影響する場合もあります。3Mは、検査方法がお客様の基準を

確実に満たすことを確認するために、お客様の環境において、特定の食品および微生物負荷生菌保存効力テスト（チャレンジテス

ト）を用いて十分な数の検体で、前増菌培地を含む検査方法を評価することをお勧めします。

3Mは、緩衝ペプトン水 (BPW) ISOを用いて3M病原菌検出アッセイ2 -

サルモネラ

を評価しました。

3M™分子検出装置は、アッセイのライシスステップ中に熱処理を行った検体を測定することを目的としており、検体中に存在する

微生物を破壊するように設計されています。アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハ

ザードとみなされる可能性がありますので、3M分子検出装置には入れないでください。

3M食品安全性部門は、設計と製造についてISO（国際標準化機構）9001認証を取得しています。

3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

検査キットは、表1に記載のとおり96検体用となっています。

表1. 3M病原菌検出アッセイキットの内容

品目特徴数量内容コメント

3M™ライシス溶液 (LS) クリアチューブに入った

ピンク色の溶液

96検体分

（8連チューブ12セット）

チューブ1本につきLS

580 µL

ラック入り、調製

済み

3M™分子検出アッセイ

2 -

サルモネラ

試薬

チューブ

緑のチューブ 96検体分

（8連チューブ12セット）

凍結乾燥特異的増幅試

薬および検出試薬

調製済み

予備キャップ緑のキャップ 96検体分

（8連キャップ12セット）

調製済み

3M™試薬コントロー

ル (RC)

フリップトップ式

クリアチューブ

16検体分

（チューブ8本入り2パウチ）

凍結乾燥コントロール

DNA、増幅試薬および

検出試薬

調製済み

クイックスタートガイド 1

陰性コントロール (NC)（キットには付属しません）は、BPW ISOなどの滅菌済前増菌培地です。水は陰性コントロールとして使用し

ないでください。

安全性

3M分子検出システムおよび3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

の製品情報に記載のすべての安全情報を読み、理解し、遵守してく

ださい。また、今後参照できるように、この安全性指示を保管しておいてください。

警告：警告は、それを避けなければ死亡または重篤な傷害ないし物的損害が発生しうる危険な状況を示します。

注記：回避できない場合、物的損害が起こり得る危険な状況を示します。

（日本語）

JA

2

W 警告

3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、ヒトまたは動物の病態診断に使用しないでください。

検査実施担当者に適切な検査技術を身につけるように指導してください（例：GLP、 ISO/IEC 17025

(4)

またはISO 7218

(5)

）。

汚染製品の出荷につながる偽陰性結果に伴うリスクを回避するために：

• プロトコルに従い、製品情報に記載のとおりに検査を行ってください。

• 3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、外箱表示および製品情報に記載のとおりに保管してください。

• 3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、有効期限までに必ず使用してください。

• 3M病原菌検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、社内または第三者による検証を行った食品、飼料、食品加工環境検体に使用してくだ

さい。

• 3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、社内または第三者による検証を行った表面、殺菌剤、プロトコル、菌株のみに使用してく

ださい。

• アリルスルホン酸塩添加中和緩衝液を含む環境検体については、試験前に1:2の希釈（検体1に対して滅菌増菌ブロス1）を行

ってください。別の方法としては、中和緩衝前増菌ブロス10

µ

L 3Mライシスチューブに滴下します。アリルスルホン酸複合体含

有中和緩衝液を含む製品は、3M™検体処理製品：BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB,

HS10NB2GおよびHS2410NB2G。

化学物質およびバイオハザードへの暴露に伴う危険を回避するために：

• 技能訓練を受けた検査実施担当者の管理下で、適切な設備のある検査室にて病原菌検査を行ってください。

培養済み前増菌培地および培養済み前増菌培地と接触する機器または接触面には、人体に有害となりうる量の病原菌が含ま

れている可能性があります。

• 試薬および汚染された検体を取り扱う際は、適切な保護衣、保護メガネの装着など、標準的な検査室の安全手順に常に従って

ください。

• 前増菌後の培地や、増幅後の試薬チューブ内容物には触れないでください。

• 現行の業界基準に従って、増菌された検体を廃棄してください。

• アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハザードと考えられる可能性がありますの

で、3M分子検出装置内には入れないでください。

アッセイ準備中の交差汚染に伴う危険を回避するために：

• 手袋を必ず着用してください（ユーザー保護と遺伝子の混入を避けるため）。

環境汚染に伴う危険を回避するために：

• 汚染廃棄物の廃棄は現行の業界基準に従ってください。

高温の液体への暴露に伴う危険を回避するために：

• ヒーターの温度設定を推奨温度以上にしないでください。

• 推奨される加熱時間を超えないでください。

• 適切な較正済みの温度計を使用して、3M™分子検出ヒートブロックインサートの温度を確認してください（例：浸線付温度計ま

たはデジタル熱電対温度計。全浸没温度計は使用しないこと）。温度計は、必ず3M分子検出ヒートブロックインサートの指定の

部位に設置してください。

注記

アッセイ準備中の交差汚染に伴う危険を回避するために：

• 試薬ペレットを水和する前に、手袋を交換してください。

• 滅菌済みのエアロゾルバリア材（フィルター付）、分子生物学グレードのピペットチップの使用を推奨します。

• 検体ごとに新しいピペットチップを使用してください。

• GLP（医薬品安全性試験実施基準）に従って検体を前増菌ブロスからライシスチューブに移してください。ピペットの汚染を回避

するため、中間的な滴下ステップを追加することもできます。例えば、前増菌された各検体を滅菌チューブに滴下することがで

きます。

• 利用可能な場合は、殺菌灯が装備された分子生物取扱エリアを使用してください。検査室の作業台および備品（ピペット、キャ

ップ／デキャップツール等）は、水で1～5% (v/v) に希釈したの家庭用漂白液またはDNA除去用液を使用して定期的に除染し

てください。

偽陽性の結果に伴う危険を回避するために：

• 増幅後のチューブは絶対に開けないでください。

• 汚染されたチューブは、常に、水で1-5% (v/v) に希釈したの家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔

離して、廃棄してください。

• 増幅後の試薬チューブは絶対にオートクレーブで加熱滅菌処理しないください。

廃棄に関する詳細および行政の規制については、安全データシートをご参照ください。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト (www.3M.com/foodsafety) をご覧いただくか、3M販売

担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。

（日本語）

JA

3

お客様の使用責任

お客様には、使用前に製品説明書および製品情報を熟知していただく責任があります。詳細につきましては、当社ウェブサイト

www.3M.com/foodsafetyをご覧いただくか、お近くの3M販売担当者または販売店までお問い合わせください。

検査方法を選択する際には、採取方法、検査プロトコル、検体の準備、取り扱い、検査手技、検体自体などの外的要因が結果に影

響することを認識することが重要です。

検査方法または製品を選択する際に、適切な基質および微生物負荷を用いて十分数の検体を評価して、選択した試験方法がお客

様の基準を満たすことをお客様の責任でご確認ください。

また、検査方法および結果が顧客または供給業者の要件を満たしているかについても、事前にお客様の責任でご確認ください。

どの検査方法を使用した場合でも、3M食品安全性製品を用いて得られた結果は、検査を実施した食品基質または工程の品質を

保証するものではありません。

各種食品基質の検査方法の評価にご利用いただくため、3Mでは3M™分子検出基質コントロールキットをご用意しました。必要に

応じて、基質コントロール (MC) を使用し、基質が3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

の検査結果に影響を及ぼすかどうかを判定

してください。3Mの検査法を採用する場合、または新規や由来の不明な基質、あるいは原材料または工程が変更された基質基質

を検査する場合は、バリデーション期間中に、基質を代表する複数の検体（由来の異なる検体）を検査してください。

基質は、成分や加工など固有の特性を備える製品の種類と定義できます。基質間の違いは、加工や外観（例：生か滅菌済みか、新

鮮か乾物か、等）の違いに起因する作用と同じように単純な場合があります。

保証の範囲 / 賠償の制限

個々の製品パッケージの限定保証条項に明示されている場合を除き、3Mは明示または黙示を問わず、商品性または特定の目的

への適合性に関する保証を含むがこれに限定されない、いかなる種類の保証も負いかねます。3M食品安全性部門の製品に欠陥

があった場合、3Mまたは指定販売店で交換あるいは製品購入価格の払い戻しをいたします。対応は上記のみとさせていただきま

す。製品の欠陥が疑われる場合は、判明した時点から60日以内に速やかに3Mに通知し、製品を3Mに返品する必要があります。返

品可否についてはカスタマーサービス（米国内は1-800-328-1671）にお電話にてご連絡いただくか、担当の公式3M食品営業安全

性販売員までお問い合わせください。

3Mの保証責任範囲

3Mは、直接的、間接的、特殊なもの、偶発的または必然的であるかを問わず、利益損失を含むがこれに限定されないあらゆる損失

または損害に対しての責任を負わないものとします。いかなる場合も、いかなる法的理論の下でも、3Mの保証責任範囲は、欠陥と

申し立てられた製品の購入金額を超えないものとします。

保管と廃棄

3M病原菌検出アッセイ2 -

サルモネラ

は2～8℃で保管し、冷凍しないでください。暗所で保管してください。キット開封後は、ホイル

パウチが破損していないことを確認してください。パウチが破損している場合は、使用しないでください。開封後、使用しない試薬チ

ューブは、凍結乾燥試薬の安定性を保つため、乾燥剤と共に再密閉可能なパウチ内に必ず保管してください。再密閉したパウチは

2～8℃で60日間保存することができます。

3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は使用期限までに必ず使用してください。使用期限とロット番号は箱の外側のラベルに記載し

ています。使用後、増菌ブロスおよび3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

には病原性の物質が含まれている可能性があります。検

査終了後は、汚染廃棄物に関する現行の業界基準に従って廃棄してください。廃棄に関する詳細および行政の規制については、安

全データシートをご参照ください。

使用方法

すべての指示に、注意深く従ってください。従わない場合、正確な結果が得られないことがあります。

検査室の作業台および備品（ピペット、キャップ／デキャップツール等）は、水で1～5% (v/v) に希釈したの家庭用漂白液または

DNA除去用液を使用して定期的に除染してください。

ユーザーは、「3M分子検出システムの設置資格 (IQ)／操作資格 (OQ) プロトコルと手順」

(6)

に記載のとおり、3M分子検出システム

のオペレーター資格 (OQ) トレーニングを受講する必要があります。

具体的な要件については、「バリデート済みの方法」の項を参照してください：

表3. AOAC®

O󼴫cial Method of Analysis

SM

2016.01およびAOAC®

Performance Tested

SM

認定証#091501に従う前増菌プロト

コル。

表4. NF VALIDATION 認定証3M 01/16 -11/16に従う前増菌プロトコル。

検体の前増菌

表2、3、4には、食品、飼料および環境検体の一般増菌プロトコルのガイドラインを示しています。

この検査法がお客様の基準に合致するかを確かめるため、別の採取プロトコルまたは希釈率でバリデートしていただき、お客様の

責任で使用の可否をご判断ください。

（日本語）

JA

4

食品

1. BPW ISO増菌培地を、試験済み基質に従って検査室周囲温度または41.5 ± 1°Cに平衡させます。表2、3、4をご覧ください。

2. 増菌培地と検体を無菌的に混合します。

3. ブレンダー、混合器またはハンドミキサーで2 ± 0.2分間、またはすべての塊が完全に分解するまで十分にホモジナイズし、前

増菌懸濁液を均質にします

(10-15)

。

a. すべての肉検体および微粒子を多く含む検体に関しては、フィルターバッグの使用を推奨します。

b. 水中で膨張し、高粘度の基質（シリアル、でんぷんなど）は、粘度が適切に低下するまでさらに希釈を行うか

（1:10以上）、BPS (ISO)

(10-13)

に滅菌蒸留水で溶解した1% (w/v) αアミラーゼを追加します。

c. 検体量が大きい粉ミルクおよびシリアルに関しては、塊を崩すため良くかき混ぜながら、検体を液体にゆっくり追加します。

4. 適切なプロトコル表の概要に従って培養します（表2、3、4を参照）。

環境検体

殺菌剤の効果を不活性化するために、検体採取装置として、中和溶液を染み込ませたスポンジを使用できます。3Mは、殺菌剤不使

用のセルローススポンジを使用することを推奨します。中和溶液には、Dey-Engley (D/E) 中和ブロスまたはリージンブロスを使用

できます。採取後は、作業領域を殺菌することを推奨します。

警告：アリルスルホン酸複合体をスポンジの水和溶液として含む中和緩衝液の使用を選択する場合には、汚染された製品の出

庫につながる偽陰性の伴う危険を回避するために、検査を行う前に増菌環境検体の1：2の希釈液（検体1に対し滅菌増菌ブロス

1）を行う必要があります。別の方法としては、中和緩衝前増菌ブロス10 µL 3Mライシスチューブに滴下します。

表面上の病原体の有無を確認するための検体採取部分の推奨サイズは、100 cm

2

（10 cm x 10 cmまたは4” x 4”）です。スポンジで

検体採取する場合には、採取部分全体をスポンジを2方向に拭くか（左から右、次に上向きから下向きに）、検査室現行のプロトコ

ルまたはFDA BAM

(1)

、USDA FSIS MLG

(2)

またはISO 18593:2018

(7)

に従って環境検体を採取します。

この検査法がお客様の基準に合致するかを確かめるため、別の採取プロトコルまたは希釈率でバリデートしていただき、お客様の

責任で使用の可否をご判断ください。

1. BPW ISO前増菌培地を検査する基質によっては41.5 ± 1℃にあらかじめ加熱します。表2、3、4をご覧ください。

2. 増菌培地と検体を無菌的に混合します。ブレンダー、混合装置またはハンドミキサーで2 ± 0.2分ホモジナイズします。適切な

プロトコル表の概要に従って培養します。表2、3、4をご覧ください。

表2.一般的な前増菌プロトコル。

検体基質検体量前増菌ブロス量

増菌温度

(± 1°C)

前増菌時間

（時間）

検体の分析

量 (µL)

(a)

プロトコル 1

食品製品（エッグパウダーおよび他のプロ

トコールで規定されている製品を除く）

(b)

25 g 225 mL BPW ISO 37 18～26 20

プロトコル 2

生および未処理の食品、エッグパウダー、

動物飼料および環境検体

(c)

25 g

225 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 18～26 20

プロトコル 3

パウダーにした乳製品（乳児用調製粉乳、

大豆ベースの乳児用乳児用調製粉乳を

含む）

25 g 225 mL BPW ISO 37 20～26 20

プロトコル 4

ココアベースの製品

（パウダー、チョコレート、菓子類など）

25 g

ブリリアントグリーン色

素を0.002%含む滅菌し

た100 g/Lの無脂肪粉

ミルク225 mL

(d,e,f)

37 24～30 20

プロトコル 5

その他：スパイス、芳香ハーブ、濃厚飼料、

インスタントの茶およびコーヒー、固形ブ

イヨンなど

25 g

0.5% K

2

SO

3

を含む2X

BPW ISO 235 mL + 滅

菌した100 g/Lの粉ミル

ク240 mL

(d,g,h)

37 24～30 10

（日本語）

JA

5

プロトコル 6

クルミ、またはクルミを含むミックスナッツ

（このプロトコルは、ピーカンナッツ、アー

モンド、ピスタチオ、カシューナッツ、栗、マ

カデミアナッツ、ブラジルナッツおよびピ

ーナツなどの他ナッツ類にも有効）

25 g

滅菌した100 g/Lの無

脂肪粉ミルク225 mL

(d,h)

37 18～24 20

(a) ライシス溶液チューブに移す検体量。ライシスセクションのステップ4.7を参照。

(b) プロトコル1で検査する製品の例：調整済みの料理、デリのサラダ、カスタード。

(c) プロトコル2で検査する製品の例：生肉、冷凍野菜、すべてのチース、発酵乳、生サラダ（レタス、バタビアレタス）。

(d) 無脂肪UHT乳は無脂肪粉ミルクの代用となります。

(e) 無脂肪乳225 mLあたり1%水性ブリリアントグリーン色素溶液0.45 mLで、ブリリアントグリーン色素の最終濃度が

0.002% (0.02 g/L) となります。

(f) 滅菌無脂肪粉ミルクを調製するには、100 gの無水無脂肪粉ミルク1 gを1 Lの蒸留水または精製水に懸濁させます。溶解する

まで渦巻状に撹拌します。121℃のオートクレーブで15分処理します。2～30℃で保存します

(8)

。

(g) 1000 mLのBPW ISOあたり5 gのK

2

SO

3

で、K

2

SO

3

で、最終濃度が0.5%となります。

(h) 滅菌した0.5% K

2

SO

3

を含む滅菌した2X BPW ISO 235 mLに、100 g/Lの無脂肪粉ミルク240 mLを添加する必要があります。

オプションの二次前増菌ステップを使用する場合には（Rappaport Vassiliadis培地など）、1:2の希釈（前増菌検体1に対し滅菌前

増菌ブロス1）を行うか、単に二次増菌検体10

µ

Lを3Mライシス溶液チューブに移すことが必要となります。テトラチオネート (TT) ブ

ロスを使用する場合には、二次前増菌検体20

µ

Lを3Mライシス溶液チューブに移しますが、このとき沈殿物をチューブに移さない

ようにＴＴ前増菌検体をボルテックスにかけたり前増菌検体チューブの底からピペットで吸い上げたりしないでください。

バリデートされた方法に関する具体的な指示

AOAC®

O󼴫cial Methods of Analysis

SM

2016.01

AOAC®

Performance Tested

SM

認定証#091501

AOAC Research Institute OMA

SM

およびPTM

SM

プログラムにおいて、3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

は、

サルモネラ

の検出に

有効な方法であることが確認されています。上記試験において検査の対象となった基質を表3に掲載します。

表3.AOAC OMA

SM

2016.01およびAOAC PTM

SM

認定証#091501に基づく増菌プロトコル。3Mライシス溶液チューブに移す検体量

は20 µLです。

検体基質検体量前増菌ブロス量

増菌温度

(± 1°C)

前増菌時間（時間）

生の牛ひき肉

25 g

225 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 10～24

325 g

975 mL BPW ISO

（加温済み）

生ひきチキン

25 g

225 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 10～24

325 g

975 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 14～24

調理済みチキンカツ 325 g 2,925 mL BPW ISO 37 18～24

ドライドッグフード

25 g 225 mL BPW ISO

37 18～24

375 g 1,500 mL BPW ISO

黒コショウ、生のエビ全体、包装され

た生のホウレンソウ、低温殺菌した米

国産チーズ

25 g 225 mL BPW ISO 37 18～24

チキン洗浄液 30 mL

30 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 18～24

チキンスポンジスポンジ1個

50 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 18～24

インスタント無脂肪粉ミルク 25 g 225 mL BPW ISO 37 20～24

（日本語）

JA

6

ココアパウダー 25 g 225 mL BPW ISO 37 24～28

低温殺菌液状全卵 100 mL 900 mL BPW ISO 37 18～24

使用済みスプラウト灌漑用水 375 mL 3,375 mL BPW ISO 37 18～24

クリーム状ピーナツバター

25 g 225 mL BPW ISO

37 18～24

375 g 3,375 mL BPW ISO

環境検体

密封コンクリートスポンジ1個

225 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 18～24

ステンレススチールスワブ1 本

10 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 18～24

密封セラミックタイルスポンジ1個

50 mL BPW ISO

（加温済み）

41.5 18～24

検体基質検体量

前増菌ブロ

ス量

増菌温度

(± 1°C)

前増菌時間

（時間）

二次前増菌培

地 (mL)

二次前増菌温

度 (±1°C)

二次前増菌時間

（時間）

生のエビ、頭

付き

25 g

225 mL BPW

ISO

37 18～24

R-V R10: 0.1

mLを10 mL

へ

(a)

41.5 4～24

(a) 10 µLの前増菌検体をライシス溶液チューブに移す。ライシスセクションのステップ4.7を参照。

AFNOR Certi󼴩cationによるNF VALIDATION

3M 01/16 -11/16

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS

http://nf-validation.afnor.org/en

有効性の終了についての詳細は、上記のウェブサイト上で入手できるNF Validation認証を参照してください。

NF VALIDATIONにより認証された方法は、ISO 6579

(3)

よりもISO 16140-2

(7)

に準拠しています。

バリデーションの範囲：ヒト用食物製品、製造環境検体（一次製造検体を含みます）、ペットフードおよび動物飼料。広範囲の植物

のバリデーションアッセイの実施によります。

検体の調製：EN ISO 6579

(3)

およびEN ISO 6887

(10-15)

に従って検体を調製してください。

ソフトウェアバージョン：認定証を参照してください。

（日本語）

JA

7

表4.NF VALIDATION 認定法3M 01/16 -11/16に従う前増菌プロトコル。

プロトコル検体量前増菌ブロス量

増菌温度

(+1°C)

前増菌時間

（時間）

検体の分析

量 (µL)

(a)

プロトコル 1：

• 広範囲の加工食物製品（エッグパウダー、

加工した果物および野菜、他のプロトコル

で規定される製品を除く）

• すべての魚および生のシーフード製品

• ペットフードおよび動物飼料

• 一次生産（非糞便）

25 g BPW ISO 225 mL 37 18～26 20

プロトコル 2：

• 広範囲の生および未加工食品（鮮魚およ

び生のシーフード、他のプロトコルで規定

される製品を除く）

• エッグパウダー

• すべての果物および野菜

• 食品生産環境検体

25 gまたは

ワイプ1枚また

はスワブ1本

加温済みBPW ISO

225 mL

41.5 18～26 20

プロトコル 3：

• パウダーにした乳製品

25 g BPW ISO 225 mL 37 20～26 20

プロトコル 4：

• ココア20%超を含むココアベースの製品

25 g

無脂肪UHT乳

225 mL + ブリリ

アントグリーン

0.002%

37 24～30 20

プロトコル 5：

• スパイス、芳香ハーブ、濃厚飼料、茶、

コーヒー、刻んだ食品

25 g

2 x BPW

ISO 235 mL

+ K

2

SO

3

0.5%

+ 無脂肪UHT乳

240 mL

37 24～30 10

プロトコル 6：

• 生肉

25 g

加温済みBPW

ISO 225 mL

41.5 10～24 20

プロトコル 7：

• 一次生産（糞便）

ブーツ拭き取

り検体1本

テトラリオネートブ

ロスに100 mL

37 22～24 20

25 g

テトラリオネートブ

ロスに225 mL

プロトコル 8：

• 乳児用調製粉乳、乳児用シリアル、プロバ

イオティクス抜きパウダー状乳製品

(b)

375 g

加温済みBPW

ISO 3375 mL

37 20～26 20

プロトコル 9：

• 乳児用調製粉乳、乳児用シリアル、プロバ

イオティクス入りパウダー状乳製品

(b)

375 g

加温済みBPW

ISO 3375 mL

+ バンコマイシン

(10 mg/L)

37 20～26 20

(a) ライシス溶液チューブに移す検体量。ライシスセクションのステップ4.7を参照。

(b) 検体量が大きい粉ミルクおよびシリアルに関しては、塊を崩すため良くかき混ぜながら、検体を液体にゆっくり追加します。

注記：

• 25 g以上の検体は、プロトコル8および9以外のNF VALIDATION検査で評価されていません。

• 短い検出プロトコルは培養条件の影響を受けやすくなります。技術規格に示されている温度条件に従う必要があります。ユー

ザーは前増菌ブロスの加温が培養前に必要な温度に達していることを確認しなければなりません。検体調製の時間、前増菌

ブロスの加温ステップ終了と食品検体の培養ステップの開始との時間差が45分を超えないようにしてください。培養中は、換

気装置つき培養器を使用することを推奨します。

• テトラチオネート (TT) ブロス前培養検体を3Mライシスチューブに移す場合には、沈殿物をチューブに移さないようにＴＴ前

増菌検体をボルテックスにかけたり前増菌検体チューブの底からピペットで吸い上げたりしないでください。沈殿物を移す

と、結果が無効になることがあります。

• 推奨されるプロトコル中断ポイントは、前増菌後または検体ライシス後です。前増菌ブロスまたは検体ライセートは、2-8℃で

最大72時間保管することができます。前増菌ブロスを保管場所から取り出したら、ライシスセクションのステップ1から再開し

てください。検体ライシスを保管場所から取り出したら、ライシスセクションのステップ8から再開してください。

（日本語）

JA

8

3M™分子検出スピードローダートレイの準備

1. 水で1～5% (v/v) に希釈したの家庭用漂白液で湿らせた布か使い捨て用タオルを使って、3M分子検出スピードローダートレ

イを拭きます。

2. 水で3M分子検出スピードローダートレイを濯ぎます。

3. 使い捨てペーパータオル等で、3M分子検出スピードローダートレイを拭きます。

4. 使用前に、3M分子検出スピードローダートレイが乾燥していることを確認してください。

3M™分子検出チルブロックインサートの準備

3M™ 分子検出チルブロックインサートを作業台の上に直に置きます。ブロックは検査室の室温 (20～25℃) で使用します。

3M™分子検出ヒートブロックインサートブロックインサートの準備

3M™ 分子検出ヒートブロックインサートをドライダブルブロックインサートヒーターユニットに入れます。ドライブロックヒーターユ

ニットをオンにして、温度を100 ± 1℃に設定します。3M分子検出ヒートブロックインサートブロックインサートが設定温度に達し

たら、温度を維持します。

注：使用するヒーターユニットによっては、3M分子検出ヒートブロックブロックインサートを約30分かけて設定温度に到達させま

す。適切な較正済みの温度計（例：浸線付温度計またはデジタル熱電対温度計。全浸没温度計は使用しないこと）を指定の部位

に設置し、3M分子検出ヒートブロックインサートが100 ± 1℃であることを確認します。

3M™分子検出装置の準備

1. 3M™病原菌検出ソフトウェアを起動してログインします。お使いのソフトウェアが最新バージョンであるかどうかを確認するに

は、3M食品安全性門の営業担当者までお問い合わせください。

2. 3M分子検出装置の電源を入れます。

3. 各検体のデータを含む検出結果を作成または編集します。詳細については、3M分子検出システムユーザーマニュアルを参照

してください。

注：3M分子検出装置自動検出システム用は、反応チューブと共に3M分子検出スピードローダートレイを入れる前に、待機状態

になっている必要があります。この加熱ステップには約20分かかり、装置のステータスバーがオレンジ色に点灯します。装置の準

備ができると、ステータスバーは緑色に変わります。

ライシス

3M分子検出ヒートブロックインサートに入れる前に、ドライバーまたはスパーテルで3Mライシスチューブラックの底部を取り外し

ます。

1. 3Mライシスチューブは、ラックに一晩（16～18時間）静置して、室温 (20～25℃) に戻します。3Mライシスチューブを室温に戻す

別の方法としては、3Mライシスチューブを作業台の上に2時間以上静置するか、3Mライシスチューブを37 ± 1℃の培養器内で

1時間保温するか、3Mライシスチューブをドライダブルブロックヒーターに入れて100 ± 1℃で30秒間加熱します。

2. キャップを閉めた状態のライシスチューブを反転させて中の液を混合させます。4時間以内に次のステップに進みます。

3. 培養器から前増菌ブロスを取り出します。

（日本語）

JA

9

4. 検体およびNC検体（滅菌増菌ブロス）のそれぞれにつき3Mライシスチューブ1本が必要です。

4.1 3Mライシスチューブのストリップは、必要な3Mライシスチューブ数分にカットすることができます。各3Mライシスチューブ

または8連チューブのストリップの数を選択してください。3Mライシスチューブを空のラックに置きます。

4.2 交差汚染を回避するため、3Mライシスチューブのキャップは一度に1ストリップずつ外し、滴下ステップごとに新しいピペッ

トチップを使用してください。

4.3 以下に記載のとおり、前増菌した検体を3Mライシスチューブに滴下します：

最初に、増菌した各検体を各3Mライシスチューブに滴下します。最後にNCを滴下します。

4.4 3M™分子検出キャップ/デキャップツール－溶解、3Mライシスチューブのキャップを一度に1ストリップずつ外します。

4.5 3Mライシスチューブのキャップを廃棄します。ライセートを再検査用に保存する場合は、キャップを清潔な容器に入れてお

き、ライシス後に再度キャップを嵌めます。

4.5.1 保存したライセートの処理については、付録Aを参照してください。

4.6 粘性検体を扱う場合には、ろ過側から採取する前に、前増菌バッグを撹拌します。

4.7 プロトコル表に他の規定がない限り、検体20 µLを3Mライシス溶液チューブに移します（プロトコル5およRVS中でのび二

次前増菌または環境検体を中和緩衝液ととも使用する場合など）。

20 µl

5. 各検体が、ストリップの対応する3Mライシスチューブに添加されるまでステップ4.4～4.7を繰り返します。

6. すべての検体を移注したら、NC（ネガティブコントロール用滅菌増菌ブロス、例：BPW）20 µLを3Mライシスチューブに滴下しま

す。水は陰性コントロールとして使用しないでください。

7. 3M分子検出ヒートブロックインサートの温度が100 ± 1℃であることを確認してください。

8. 3M分子検出ヒートブロックインサート内にカバーを外した3Mライシスチューブラックを入れて、15 ± 1分間加熱します。加熱

中、3Mライシス液はピンク色（低温）から黄色（高温）に変色します。

8.1. アッセイのライシスステップ中に適切な熱処理を行っていない検体は、潜在的バイオハザードとみなされる可能性があり

ますので、3M分子検出装置には入れないでください。

9. ヒートブロックからカバーを外した3M ライシスチューブラックを取り出し、3M 分子検出チルブロックインサート内で5分間以上

（最大10分間）冷却します。室温で使用された3M 分子検出チルブロックインサートは、作業台の上に直に置いてください。

冷却されると、ライシス溶液はピンク色に戻ります。

10. 3M分子検出チルブロックインサートから3Mライシスチューブラックを取り出します。

00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

（日本語）

JA

10

増幅

1. 検体およびNCのそれぞれにつき3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

試薬チューブ1本が必要です。

1.1 チューブのストリップは、必要な数に合わせてカットできます。各3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

試薬チューブまたは

8連チューブのストリップの数を選択してください。

1.2 試薬チューブを空のラックに置きます。

1.3 チューブの底の試薬ペレットを撹拌しないでください。

2. 試薬コントロールチューブを1本選択して、ラックに置きます。

3. 交差汚染を回避するため、試薬チューブのキャップは一度に1ストリップずつ外し、滴下ステップごとに新しいピペットチップを

使用してください。

4. 下記のように、各ライセートを3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

試薬チューブおよび3M試薬コントロールチューブに滴下して

ください：

最初に各検体ライセートを個々の試薬チューブに移し、次にNCを移します。最後に3M試薬コントロールチューブを水和します。

5. 3M™分子検出キャップ／デキャップツール－試薬用を使用して、3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

試薬チューブのキャップ

を一度に 1ストリップずつ外します。キャップを廃棄します。

5.1 検体レイセート20 µLを3Mライシスチューブの液体の上部1/2（沈殿物は避けてください）から取り、対応する3M分子検

出アッセイ2 -

サルモネラ

試薬チューブに分注します。ペレットが撹拌されないよう、一定の角度で分注します。ピペット操

作で5回で静かに混合します。

5.2 個々の検体ライセートをストリップ内の対応する3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

試薬チューブに添加するまで、ステッ

プ5.1を繰り返します。

5.3 3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

試薬チューブに同梱の予備キャップで蓋をし、3M分子検出キャップ／デキャップツー

ル－試薬用の丸い側を使用して前後に圧をかけ、キャップをしっかりと締めます。

5.4 検査する検体数について、ステップ5.1～5.3を繰り返します。

5.5 すべての検体ライシス液を滴下したら、ステップ5.1～5.3を繰り返してNCライセート20 µLを3M分子検出アッセイ2 -

サル

モネラ

試薬チューブに滴下します。

5.6 3M試薬コントロールチューブにNCライセート20 µLを滴下しま\す。ペレットが撹拌されないよう、一定の角度で分注しま

す。ピペット操作で5回で静かに混合します。

6. 清潔な、殺菌済み3M分子検出スピードローダートレイにキャップをしたチューブを装填します。3M分子検出スピードローダー

トレイを閉めて、留めがねをかけます。

20 µL

7. 3M病原菌検出用ソフトウェアで設定した検査内容を確認します。

8. ソフトウェアのスタートボタンをクリックして、使用する装置を選択します。選択された装置の蓋が自動的に開きます。

9. 3M分子検出装置に3M分子検出スピードローダートレイを置き、蓋を閉めてアッセイをスタートします。結果は60分ほどで判定

されますが、陽性の場合はこれより早く検出されます。

10. アッセイ終了後、3M分子検出スピードローダートレイを3M分子検出装置から取り出し、チューブを水で1～5% (v/v) に希釈し

た家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄してください。

注記：交差汚染による偽陽性の危険を最小限に抑えるため、増幅DNAの入った試薬チューブは絶対に開けないでください。これ

には、3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

試薬、3M試薬コントロール、3M基質コントロールチューブが含まれます。汚染されたチ

ューブは、常に、水で1～5% (v/v) に希釈した家庭用漂白液に1時間浸漬した後、アッセイの準備作業領域から隔離して、廃棄して

ください。

（日本語）

JA

11

結果と解釈

アルゴリズムが核酸増幅の結果より得られた光出力曲線を解釈します。結果はソフトウェアが自動的に解析し、結果に応じて色分

けされます。陽性または陰性の結果は、それぞれが持つ固有の曲線パラメータを解析することにより特定されます。結果が陽性と

推定される場合はリアルタイムでレポートされますが、陰性およびInspect（検証が必要な結果）の場合は、その検査が完了した後

に表示されます。

陽性と推定される検体は、検査室の標準作業手順書、または適切な参照法

(1,2,3)

、に従って確認する必要があります。まず、一

次3M BPW ISO前増菌検体を二次前増菌ブロスに移し、プレート接種したのち、適切な生化学的、血清学的手法を使用して単離菌

を確認してください。

注：陰性検体がシステムとして0を返さない場合でも、3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

増幅試薬は「バックグラウンド」相対発

光量 (RLU) を有します。

異常な光出力がみられるなどの稀なケースについては、アルゴリズムがこれを「再検査してください」と表示します。3M社はお客様

に、「再検査」検体に対して検査を再度行うことを推奨します。その結果が続けて再検査であった場合は、任意の別の方法または行

政の規制によって指定されたとおりに確認検査を行ってください。

ウェル

タイプ

ウェルの結果の記号結果判定

検体

陽性検体な標的病原体について陽性と推定されます。

検体

陰性検体な標的病原体について陰性と推定されます。

検体

阻害

検体基質がアッセイを阻害しました。差異検査が必要

な場合があります。詳細については、トラブルシュー

ティングセクションおよびアッセイキット製品情報を

参照してください。

検体

検証が必要

標的病原体の有無が確定できませんでした。差異検

査が必要な場合があります。詳細については、トラブ

ルシューティングセクションおよびアッセイキット製品

情報を参照してください。

検体

エラー

生物発光が検出されませんでした。差異検査が必要

な場合があります。詳細については、トラブルシュー

ティングセクションおよびアッセイキット製品情報を

参照してください。

NF VALIDATIONにより認証された方法に基づく結果の確認

NF VALIDATIONに照らして3M病原菌検出アッセイ2 -

サルモネラ

により陽性と特定される検体はすべて、以下の検査のうちの一つ

により確認する必要があります：

オプション 1：緩衝ペプトン水

(3)

前増菌から始めて、ISO 6579

(3)

基準を使用する。

オプション 2：以下で構成される確認方法を実施します: BPW ISO

(3)

前増菌検体0.1 mLテトラチオネートブロス前増菌検体

（一次生産検体）を10 mLのRVSブロスに移します。41.5℃で24 ± 3時間培養します。

サルモネラ

に特異的なキシロース・リジン・

デソキシコール酸 (XLD)

(3)

カンテン培地または色素生成カンテン培地にストリーキングします。単離したコロニーに対し直接Oxoid

サルモネラ

ラテックス検査によりラッテクス凝集を行います。

オプション 3：EN ISO 7218

(5)

基準に記載されている通り、核酸プローブを使用して、XLDまたは色素生成カンテン培地から単離した

コロニーに対して検査を実施します（オプション1または2を参照）。この検査は3M分子検出アッセイ2 -

サルモネラ

を使用して実施

しないでください。

オプション 4：3M病原菌検出アッセイ2 -

サルモネラ

とは原理が異なる必要があるNF VALIDATIONで認証済みのその他方法を使

用します。この第2のバリデート済みの方法について記述されている完全なプロトコルを必ず使用してください。確認開始に先立つ

ステップはすべて、両方の方法に共通している必要があります。

結果が一致しない場合（3M病原菌検出アッセイ2 -

サルモネラ

で陽性と推定されたものの、上記の方法、特にラテックス凝集検査

では確認できなかった場合）は、検査室は必要なステップに従って、得られた結果の有効性を確認しなければなりません。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト (www.3M.com/foodsafety) をご覧いただくか、3M販売

担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。

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3M Molecular Detection Assay 2 - Salmonella MDA2SAL96, 96 tests, 1 ea 取扱説明書

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