3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes MDA2LMO96, 96 tests, 1 ea 取扱説明書

タイプ
取扱説明書
Listeria Monocytogenes
2
Product Instructions
MDA2LMO96
EN
Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes
FR
Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes version 2
DE
Molekulare Detektion2– Listeria monocytogenes Nachweis
IT
Analisi molecolare di seconda generazione per il rilevamento
diListeria monocytogenes
ES
Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes
NL
Moleculair detectie assay 2 Listeria monocytogenes
SV
Molecular Detection Assay 2 – Listeria monocytogenes
DA
Molekylær Detektions Analyse 2 - Listeria monocytogenes
NO
Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria monocytogenes
FI
Molekyläärinen testisetti 2 - Listeria monocytogenes
PT
Ensaio para Detecção Molecular de Listeria monocytogenes 2
EL
Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης Listeria monocytogenes 2
PL
Molekularny test do wykrywania 2 – Listeria monocytogenes
RU
Молекулярный анализ 2 – Listeria monocytogenes
TR
Moleküler Tayin Testi Listeria monocytogenes-2
JA
分子検出2 -
ス テ ア・モ ノ ト ゲ ネ ス
ZH
单核细胞增生李斯特菌分子检测分析 2 -
单核细胞增生李斯特菌
(Simpli󼴩ed)
ZH
分子檢測套組 2 -
單增李斯特菌
(Traditional)
TH
ชุดทดสอบเชื้อ
ลีสทีเรีย
โมโนไซโตจีเนส
ระดับโมเลกุล2
KO
󻉓󻱟󽴔󺅏󼉫󽴔󼕳󼞇
󺹻󻝳󼘛󺹻󻨓
󺽷󺙇󻕻󻱃󼙯󻳫󺗳󻝳󻭸
ID
Deteksi Molekuler untuk Pengujian Listeria monocytogenes 2
1
(English)
EN
3
Issue Date: 2016-10
Product Instructions
Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes
Product Description and Intended Use
3M™ Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes is used with the 3M™ Molecular Detection System for the
rapid and specic detection of Listeria monocytogenes in enriched food and environmental samples.
The 3M Molecular Detection Assays use loop-mediated isothermal amplication to rapidly amplify nucleic acid sequences
with high specicity and sensitivity, combined with bioluminescence to detect the amplication. Presumptive positive
results are reported in real-time while negative results are displayed after the assay is completed. Presumptive positive
results should be conrmed using your preferred method or as specied by local regulations
(1, 2, 3)
.
The 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes is intended for use in a laboratory environment by
professionals trained in laboratory techniques. 3M has not documented the use of this product in industries other than food
or beverage. For example, 3M has not documented this product for testing water, pharmaceutical, cosmetics, clinical or
veterinary samples. The 3M Molecular Detection Assay - 2 Listeria monocytogenes has not been evaluated with all possible
testing protocols or with all possible strains of bacteria.
As with all test methods, the source, formulation and quality of enrichment medium can inuence the results. Factors
such as sampling methods, testing protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may also inuence
results. 3M recommends evaluation of the method including enrichment medium, in the user’s environment using a
sucient number of samples with particular foods and microbial challenges to ensure that the method meets the user’s
criteria.
3M has evaluated the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes with Demi-Fraser Broth containing Ferric
Ammonium Citrate and Fraser Broth containing Ferric Ammonium Citrate as needed. A typical formulation of this medium
follows below.
Demi-Fraser Broth Base Typical Formula (g/L) Fraser Broth Base Typical Formula (g/L)
Sodium Chloride 20 g Sodium Chloride 20 g
Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous * 9.6 g Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous 9.6 g
Beef Extract 5.0 g Beef Extract 5.0 g
Pancreatic Digest of Casein 5.0 g Pancreatic Digest of Casein 5.0 g
Peptic Digest of Animal Tissue 5.0 g Peptic Digest of Animal Tissue 5.0 g
Yeast Extract 5.0 g Yeast Extract 5.0 g
Lithium Chloride 3.0 g Lithium Chloride 3.0 g
Potassium Phosphate, monobasic 1.35 g Potassium Phosphate, monobasic 1.35 g
Esculin 1.0 g Esculin 1.0 g
Acriavin HCl 0.0125 g Acriavin HCl 0.025 g
Nalidixic Acid 0.01 g Nalidixic Acid 0.02 g
* Substitute: Sodium Phosphate, dibasic, dihydrate 12.0 g
Fraser Broth Supplement
(Ingredients per 10 mL vial. One vial is added to one liter of basal medium.)
Ferric Ammonium Citrate 0.5g/10mL
Final pH 7.2 ± 0.2 at 25°C
The 3M™ Molecular Detection Instrument is intended for use with samples that have undergone heat treatment during
the assay lysis step, which is designed to destroy organisms present in the sample. Samples that have not been properly
heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard and should NOT be inserted into the 3M
Molecular Detection Instrument.
3M Food Safety is certied to ISO (International Organization for Standardization) 9001 for design and manufacturing.
The 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes test kit contains 96 tests, described in Table 1.
2
(English)
EN
Table 1. Kit Components
Item Identication Quantity Contents Comments
Lysis Solution (LS) tubes
Pink solution in
clear tubes
96 (12 strips of 8 tubes) 580 L of LS per tube
Racked and
ready to use
Listeria monocytogenes
Reagent tubes
Yellow tubes 96 (12 strips of 8 tubes)
Lyophilized specic
amplication and detection mix
Ready to use
Extra caps Yellow caps 96 (12 strips of 8 caps) Ready to use
Reagent Control (RC)
Clear ip-top
tubes
16 (2 pouches of 8
individual tubes)
Lyophilized control DNA,
amplication and detection mix
Ready to use
Quick Start Guide 1
The Negative Control, not provided in the kit, is sterile enrichment medium, e.g., Demi-Fraser Broth. Do not use water as a
Negative Control.
Safety
The user should read, understand and follow all safety information in the instructions for the 3M Molecular Detection System
and the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes. Retain the safety instructions for future reference.
WARNING: Indicates a hazardous situation, which, if not avoided, could result in death or serious injury and/or
property damage.
CAUTION: Indicates a hazardous situation, which, if not avoided, could result in minor or moderate injury and/or
property damage.
NOTICE: Indicates a potentially hazardous situation which, if not avoided, could result in property damage.
W WARNING
Do not use the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes in the diagnosis of conditions in humans or
animals.
The 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes method may generate Listeria monocytogenes to levels
sucient to cause stillbirths and fatalities in pregnant women and the immunocompromised, if exposed.
The user must train its personnel in current proper testing techniques: for example, Good Laboratory Practices,
ISO/IEC 17025
(4)
, or ISO 7218
(5)
.
To reduce the risks associated with a false-negative result leading to the release of contaminated product:
Follow the protocol and perform the tests exactly as stated in the product instructions.
Store the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes as indicated on the package and in the product
instructions.
Always use the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes by the expiration date.
Use the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes for food and environmental samples that have been
validated internally or by a third party.
Use the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes only for surfaces, sanitizers, protocols and bacterial
strains that have been validated internally or by a third party.
For an environmental sample containing Neutralizing Buer with aryl sulfonate complex, perform a 1:2 dilution before
testing (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth). Another option is to transfer 10 L of the NB enrichment
into the LS tubes. 3M™ sample handling products which include Neutralizing Buer with aryl sulfonate complex:
BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, XSLSSL10NB, HS10NB and HS119510NB.
To reduce the risks associated with exposure to chemicals and biohazards:
It is strongly recommended that female laboratory sta be informed of the risk to a developing fetus resulting from
infection of the mother through exposure to Listeria monocytogenes.
Perform pathogen testing in a properly equipped laboratory under the control of trained personnel.
Always follow standard laboratory safety practices, including wearing appropriate protective apparel and eye
protection while handling reagents and contaminated samples.
Avoid contact with the contents of the enrichment media and reagent tubes after amplication.
Dispose of enriched samples according to current industry standards.
Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard
and should NOT be inserted into the 3M Molecular Detection Instrument.
To reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:
Always wear gloves (to protect the user and prevent introduction of nucleases).
To reduce the risks associated with environmental contamination:
Follow current industry standards for disposal of contaminated waste.
3
(English)
EN
CAUTION
Do not exceed the recommended temperature setting on heater.
Do not exceed the recommended heating time.
Use an appropriate, calibrated thermometer to verify the 3M™ Molecular Detection Heat Block Insert temperature
(e.g., a partial immersion thermometer or digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer.) The
thermometer must be placed in the designated location in the 3M Molecular Detection Heat Block Insert.
NOTICE
To reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:
Use of sterile, aerosol barrier (ltered), molecular biology grade pipette tips is recommended.
Use a new pipette tip for each sample transfer.
Use Good Laboratory Practices to transfer the sample from the enrichment to the lysis tube. To avoid pipettor
contamination, the user may choose to add an intermediate transfer step. For example, the user can transfer each
enriched sample into a sterile tube.
Use a molecular biology workstation containing germicidal lamp where available.
Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1- 5% (v:v in
water) household bleach solution or DNA removal solution.
To reduce the risks associated with a false-positive result:
Never open tubes post amplication.
Always dispose of the contaminated tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour and
away from the assay preparation area.
Consult the Safety Data Sheet for additional information and local regulations for disposal.
If you have questions about specic applications or procedures, please visit our website at www.3M.com/foodsafety or
contact your local 3M representative or distributor.
Limitation of Warranties / Limited Remedy
EXCEPT AS EXPRESSLY STATED IN A LIMITED WARRANTY SECTION OF INDIVIDUAL PRODUCT PACKAGING, 3M
DISCLAIMS ALL EXPRESS AND IMPLIED WARRANTIES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO, ANY WARRANTIES
OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR USE. If any 3M Food Safety Product is defective, 3M or its
authorized distributor will, at its option, replace or refund the purchase price of the product. These are your exclusive
remedies. You must promptly notify 3M within sixty days of discovery of any suspected defects in a product and return
it to 3M. Please call Customer Service (1-800-328-1671 in the U.S.) or your ocial 3M Food Safety representative for a
Returned Goods Authorization.
Limitation of 3M Liability
3M WILL NOT BE LIABLE FOR ANY LOSS OR DAMAGES, WHETHER DIRECT, INDIRECT, SPECIAL, INCIDENTAL OR
CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO LOST PROFITS. In no event shall 3M’s liability under
any legal theory exceed the purchase price of the product alleged to be defective.
User Responsibility
Users are responsible for familiarizing themselves with product instructions and information. Visit our website at
www.3M.com/foodsafety, or contact your local 3M representative or distributor for more information.
When selecting a test method, it is important to recognize that external factors such as sampling methods, testing
protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may inuence results.
It is the user’s responsibility in selecting any test method or product to evaluate a sucient number of samples with the
appropriate matrices and microbial challenges to satisfy the user that the chosen test method meets the user’s criteria.
It is also the user’s responsibility to determine that any test methods and results meet its customers’ and suppliers
requirements.
As with any test method, results obtained from use of any 3M Food Safety product do not constitute a guarantee of the
quality of the matrices or processes tested.
To help customers evaluate the method for various food matrices, 3M has developed the 3M™ Molecular Detection
Matrix Control kit. When needed, use the Matrix Control (MC) to determine if the matrix has the ability to impact the
3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes results. Test several samples representative of the matrix, i.e.
samples obtained from dierent origin, during any validation period when adopting the 3M method or when testing new or
unknown matrices or matrices that have undergone raw material or process changes.
A matrix can be dened as a type of product with intrinsic properties such as composition and process. Dierences
between matrices may be as simple as the eects caused by dierences in their processing or presentation for example,
raw vs. pasteurized; fresh vs. dried, etc.
4
(English)
EN
Storage and Disposal
Store the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes at 2-8°C. Do not freeze. Keep kit away from light
during storage. After opening the kit, check that the foil pouch is undamaged. If the pouch is damaged, do not use. After
opening, unused reagent tubes should always be stored in the re-sealable pouch with the desiccant inside to maintain
stability of the lyophilized reagents. Store resealed pouches at 2-8°C for no longer than 60 days.
Do not use 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes past the expiration date. Expiration date and lot
number are noted on the outside label of the box. After use, the enrichment medium and the 3M Molecular Detection
Assay 2 - Listeria monocytogenes tubes can potentially contain pathogenic materials. When testing is complete, follow
current industry standards for the disposal of contaminated waste. Consult the Safety Data Sheet for additional information
and local regulations for disposal.
Instructions for Use
Follow all instructions carefully. Failure to do so may lead to inaccurate results.
Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1- 5% (v:v in water)
household bleach solution or DNA removal solution.
The user should complete the 3M Molecular Detection System operator qualication (OQ) training, as described in the
“Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular Detection
System” document
(6)
.
See Section “Specic Instructions for validated methods“ for specic requirements:
Table 3 for enrichment protocols according to AOAC
®
Ocial Method
SM
2016.08 and AOAC Performance Tested
SM
Certicate #081501
Table 4 for enrichment protocols according to NF Validation certicate 3M 01/15-09/16
Sample Enrichment
Tables 2, 3 or 4 present guidance for the enrichment of food and environmental samples. It is the user’s responsibility to
validate alternate sampling protocols or dilution ratios to ensure this test method meets the user’s criteria.
Foods
1. Allow the Demi-Fraser Broth enrichment medium (includes ferric ammonium citrate) to equilibrate to ambient laboratory
temperature.
2. Aseptically combine the enrichment medium and sample according to Tables 2, 3 or 4. For all meat and highly
particulate samples, the use of lter bags is recommended.
3. Homogenize thoroughly by blending, stomaching, or hand mixing for 2 ± 0.2 minutes. Incubate at 37 ±1°C according to
Tables 2, 3 or 4.
4. If required (See Tables 2, 3 or 4), transfer 0.1 mL of the primary enrichment into 10 mL of Fraser Broth. Incubate at 37
±1°C for 20-24 hours
Environmental Samples
Sample collection devices can be a sponge hydrated with a neutralizing solution to inactivate the eects of the sanitizers.
3M recommends the use of a biocide-free cellulose sponge. Neutralizing solution can be Dey-Engley (D/E) Neutralizing
Broth or Letheen broth. It is recommended to sanitize the area after sampling.
WARNING: Should you select to use Neutralizing Buer (NB) that contains aryl sulfonate complex as the hydrating
solution for the sponge, it is required to perform a 1:2 dilution (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth) of the
enriched environmental sample before testing in order to reduce the risks associated with a false-negative result leading
to the release of contaminated product
The recommended size of the sampling area to verify the presence or absence of the pathogen on the surface is at least
100 cm
2
(10 cm x 10 cm or 4”x4”). When sampling with a sponge, cover the entire area going in two directions (left to right
then up and down) or collect environmental samples following your current sampling protocol or according to the FDA
BAM
(1)
, USDA FSIS MLG
(2)
or ISO 18593
(7)
guidelines.
1. Allow the Demi-Fraser Broth enrichment medium (includes ferric ammonium citrate) to equilibrate to ambient laboratory
temperature.
2. Aseptically combine the enrichment medium and sample according to Tables 2, 3 or 4.
3. Homogenize thoroughly by blending, stomaching, or hand mixing for 2 ± 0.2 minutes. Incubate at 37 ±1°C for 24-30
hours according to Tables 2, 3, or 4.
5
(English)
EN
Table 2: General enrichment protocols using Demi-Fraser Broth and Fraser Broth at 37 ± 1°C as needed.
Sample Matrix
Sample
Size
Enrichment
Broth
Volume
(mL)
Enrichment
Time (hr)
Heat-processed,
cooked, cured
meats, poultry,
seafood and sh
Heat-processed /
pasteurized dairy
products
Produce and
vegetables
Multi-component
foods
25 g 225 24-30
Environmental
samples
(a)
1 sponge 100 or 225 24-30
1 swab 10 24-30
Raw meat, poultry,
seafood, sh
25 g 475 28-32
Sample Matrix
Primary Enrichment
(Demi-Fraser Broth)
Secondary Enrichment
(Fraser Broth)
Sample
Analysis
Volume
(a)
Sample
Size
Enrichment
Broth
Volume
(mL)
Enrichment
Time (hr)
Sample Size Enrichment Time (hr)
Raw dairy products 25 g 225 20-24
Transfer
0.1 mL into
10 mL Fraser
Broth
20-24 10 L
(a) Volume of sample transferred to Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.6 of Lysis section.
Specic Instructions for Validated Methods
AOAC
®
Ocial Method
SM
2016.08
AOAC Performance Tested Method
SM
# 081501
In AOAC PTM studies, the3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes was found to be an eective method
for the detection of Listeria monocytogenes. The matrices tested in the study are shown in Table 3.
6
(English)
EN
Table 3. Enrichment protocols according to AOAC Ocial Methods
SM
2016.08 and Performance Tested
SM
Certicate
#081501.
Sample Matrix Sample Size Enrichment Broth Volume (mL) Enrichment Time (hr)
Beef hot dogs, Queso Fresco,
Vanilla Ice Cream, 4%
Milk Fat Cottage Cheese,
3% chocolate whole milk,
romaine lettuce, bagged raw
spinach, cold smoked salmon
25 g 225 24-30
Raw chicken 25 g 475 28-32
Deli turkey 125 g 1125 24-30
Cantaloupe Whole melon Enough volume to allow melon to oat 26-30
Environmental
samples:
Stainless steel 1 sponge 225 24-30
Sealed concrete 1 sponge 100 24-30
Plastic 1 swab 10 24-30
NF Validation by AFNOR Certication
3M 01/15-09/16
Alternative Analytical Methods for Agribusiness
http://nf-validation.afnor.org/en
For more information about end of validity, please refer to NF VALIDATION certicate available on the website mentioned
above.
NF Validation certied method in compliance with ISO 16140
(9)
in comparison to ISO 11290
(3)
Scope of the validation: All human food and environmental samples (excluding primary production samples)
Sample preparation: Samples should be prepared according to EN ISO 11290
(3)
and EN ISO 6887
(8)
Software version: See certicate
7
(English)
EN
Table 4: Enrichment protocols according to NF VALIDATION certied method 3M 01/15-09/16.
General
Protocol
Sam-
ple
Size
Enrichment
Broth
Volume
(mL)
Enrich-
ment Tem-
perature
(±1°C)
Enrich-
ment Time
(hr)
Sample
Analysis
Volume
(a)
Recom-
mended
interrup-
tion point
All food
samples
(except
raw meats,
raw
seafood,
and raw
dairy
products)
25 g
225 37 24-30 20 µL
- Demi-
Fraser
up to 72
hours
- lysate at
-20°C,
- lysate
4°C up to
72 hours
Environ-
mental
samples
25 g,
1 swab,
or
1 wipe
Specic
Protocol
Primary Enrichment (Demi-Fraser Broth) Secondary Enrichment (Fraser Broth)
Sam-
ple
Size
Enrichment
Broth Vol-
ume (mL)
Enrich-
ment Tem-
perature
(±1°C)
Enrich-
ment Time
(hr)
Sample
Size
Enrich-
ment Tem-
perature
(±1°C)
Enrichment
Time (hr)
Sample
Analysis
Volume
(a)
Recom-
mended
interrup-
tion point
Raw
meats, raw
seafood,
and raw
dairy
products
25 g 225 37 20-24
Tranfer
0.1 mL
into
10 mL
Fraser
Broth
37 20-24 10 µL
- Demi-
Fraser
up to 72
hours
- lysate at
-20°C,
- lysate
4°C up
to 72
hours
(a) Volume of sample transferred to Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.6 of Lysis section.
Note
Samples larger than 25 g have not been tested in the NF validation study.
Preparation of the 3M™ Molecular Detection Speed Loader Tray
1. Wet a cloth with a 1-5% (v:v in water) household bleach solution and wipe the 3M™ Molecular Detection Speed Loader
Tray.
2. Rinse the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray with water.
3. Use a disposable towel to wipe the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray dry.
4. Ensure the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray is dry before use.
Preparation of the 3M™ Molecular Detection Chill Block Insert
Place the 3M™ Molecular Detection Chill Block directly on the laboratory bench; (the 3M™ Molecular Detection Chill
Block Tray is not used). Use the chill block at ambient laboratory temperature (20-25°C).
Preparation of the 3M™ Molecular Detection Heat Block Insert
Place the 3M™ Molecular Detection Heat Block Insert in a dry double block heater unit. Turn on the dry block heater unit and
set the temperature to allow the 3M Molecular Detection Heat Block Insert to reach and maintain a temperature of 100 ±1°C.
Note: Depending on the heater unit, allow approximately 30 minutes for the 3M Molecular Detection Heat Block Insert
to reach temperature. Using an appropriate, calibrated thermometer (e.g., a partial immersion thermometer or digital
thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer) placed in the designated location, verify that the 3M
Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ±1°C.
Preparation of the 3M™ Molecular Detection Instrument
1. Launch the 3M™ Molecular Detection Software and log in. Contact your 3M Food Safety representative to ensure you
have the most updated version of the software.
2. Turn on the 3M Molecular Detection Instrument.
8
(English)
EN
3. Create or edit a run with data for each sample. Refer to the 3M Molecular Detection System User Manual for details.
Note: The 3M Molecular Detection Instrument must reach and maintain temperature of 60°C before inserting the 3M
Molecular Detection Speed Loader Tray with reaction tubes. This heating step takes approximately 20 minutes and is
indicated by an ORANGE light on the instrument’s status bar. When the instrument is ready to start a run, the status bar
will turn GREEN.
Lysis
1. Allow the lysis solution (LS) tubes to warm up by setting the rack at room temperature (20-25°C) overnight
(16-18 hours). Alternatives to equilibrate the LS tubes to room temperature are to set the LS tubes on the laboratory
bench for at least 2 hours, incubate the LS tubes in a 37 ±1°C incubator for 1 hour or place them in a dry double block
heater for 30 seconds at 100°C.
2. Invert the capped tubes to mix. Proceed to next step within 4 hrs.
3. Remove the enrichment broth from the incubator.
4. One LS tube is required for each sample and the Negative Control (NC) (sterile enrichment medium) sample.
4.1 LS tube strips can be cut to desired LS tube number. Select the number of individual LS tubes or 8-tube strips
needed. Place the LS tubes in an empty rack.
4.2 To avoid cross-contamination, decap one LS tubes strip at a time and use a new pipette tip for each transfer step.
4.3 Transfer enriched sample to LS tubes as described below:
Transfer each enriched sample into an individual LS tube rst. Transfer the NC last.
4.4 Use the 3M™ Molecular Detection Cap/Decap Tool-Lysis to decap one LS tube strip - one strip at a time.
4.5 Discard the LS tube cap – if lysate will be retained for retest, place the caps into a clean container for re-application
after lysis. For processing of retained lysate, see Appendix A.
4.6 Transfer 20 µL of sample into a LS tube unless otherwise indicated in Protocols from Tables 2, 3, or 4.
5. Repeat step 4.2 until each individual sample has been added to a corresponding LS tube in the strip.
20 µl
6. Repeat steps 4.1 to 4.6 as needed, for the number of samples to be tested.
7. When all samples have been transferred, transfer 20 µL of NC (sterile enrichment medium, e.g., Demi-Fraser Broth) into
a LS tube. Do not use water as a NC.
8. Verify that the temperature of the 3M Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ±1°C.
9. Place the uncovered rack of LS tubes in the 3M Molecular Detection Heat Block Insert and heat for 15 ±1 minutes.
During heating, the LS solution will change from pink (cool) to yellow (hot).
Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard
and should NOT be inserted into the 3M Molecular Detection Instrument.
10. Remove the uncovered rack of LS tubes from the heating block and allow to cool in the 3M Molecular Detection Chill
Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes. The 3M Molecular Chill Block Insert, used at ambient
temperature without the Molecular Detection Chill Block Tray should sit directly on the laboratory bench. When cool,
the lysis solution will revert to a pink color.
11. Remove the rack of LS tubes from the 3M Molecular Detection Chill Block Insert.
00:15:00
99-101ºC
20-25ºC
00:05:00
9
(English)
EN
Amplication
1. One Reagent tube is required for each sample and the NC.
1.1 Reagent tube strips can be cut to desired tube number. Select the number of individual Reagent tubes or 8-tube
strips needed.
1.2 Place Reagent tubes in an empty rack.
1.3 Avoid disturbing the reagent pellets from the bottom of the tubes.
2. Select 1 Reagent Control (RC) tube and place in rack.
3. To avoid cross-contamination, decap one Reagent tube strip at a time and use a new pipette tip for each transfer step.
4. Transfer lysate to Reagent tubes and RC tube as described below:
Transfer each sample lysate into individual Reagent tubes rst followed by the NC. Hydrate the RC tube last.
5. Use the 3M™ Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to decap the Reagent tubes–one Reagent tube strip at a
time. Discard cap.
5.1 Transfer 20 µL of Sample lysate from the upper ½ of the liquid (avoid precipitate) in the LS tube into
corresponding Reagent tube. Dispense at an angle to avoid disturbing the pellets. Mix by gently pipetting up
and down 5 times.
5.2 Repeat step 5.1 until individual Sample lysate has been added to a corresponding Reagent tube in the strip.
5.3 Cover the Reagent tubes with the provided extra caps and use the rounded side of the 3M Molecular Detection
Cap/Decap Tool-Reagent to apply pressure in a back and forth motion ensuring that the cap is tightly applied.
5.4 Repeat step 5.1 as needed, for the number of samples to be tested.
5.5 When all sample lysates have been transferred, repeat 5.1 to transfer 20 µL of NC lysate into a Reagent tube.
5.6 Transfer 20 µL of NC lysate into a RC tube. Dispense at an angle to avoid disturbing the pellets. Mix by gently
pipetting up and down 5 times.
6. Load capped tubes into a clean and decontaminated 3M Molecular Detection Speed Loader Tray. Close and latch the
3M Molecular Detection Speed Loader Tray lid.
20 µL
7. Review and conrm the congured run in the 3M Molecular Detection Software.
8. Click the Start button in the software and select instrument for use. The selected instrument’s lid automatically opens.
9. Place the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray into the 3M Molecular Detection Instrument and close the lid to
start the assay. Results are provided within 75 minutes, although positives may be detected sooner.
10. After the assay is complete, remove the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray from the 3M Molecular Detection
Instrument and dispose of the tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour and away
from the assay preparation area.
NOTICE: To minimize the risk of false positives due to cross-contamination, never open reagent tubes containing
amplied DNA. This includes Reagent Control, Reagent, and Matrix Control tubes. Always dispose of sealed reagent
tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour and away from the assay preparation area.
Results and Interpretation
An algorithm interprets the light output curve resulting from the detection of the nucleic acid amplication. Results are
analyzed automatically by the software and are color-coded based on the result. A Positive or Negative result is determined
by analysis of a number of unique curve parameters. Presumptive positive results are reported in real-time while Negative
and Inspect results will be displayed after the run is completed.
Presumptive positive samples should be conrmed as per the laboratory standard operating procedures or by following
the appropriate reference method conrmation
(1, 2, 3)
, beginning with transfer from the primary enrichment to secondary
enrichment broth (if applicable), followed by subsequent plating and conrmation of isolates using appropriate
biochemical and serological methods.
10
(English)
EN
In the context of the NF VALIDATION, all samples identied as positive by the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria
monocytogenes must be conrmed by one of the following tests:
Option 1: Using the ISO 11290
(3)
standard starting from Demi-Fraser enrichment
Option 2: Implementing a conrmation method consisting of the following: Transfer 0.1 mL of the Demi-Fraser broth.
Streak directly onto Ottaviani Agosti agar described in ISO 11290
(3)
.
Option 3: Using nucleic acid probes as described in EN ISO 7218
(5)
standard, performed on isolated colonies, from
selective agar (see Options 1 or 2).
Option 4: Using any other method certied NF VALIDATION, the principle of which must be dierent from 3M Molecular
Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes. The complete protocol described for this second validated method must be
used. All steps prior to the start of conrmation must be common to both methods.
In the event of discordant results (presumptive positive with the alternative method, non-conrmed by one of the means
described above) the laboratory must follow the necessary steps to ensure the validity of the result obtained.
NOTE: Even a negative sample will not give a zero reading as the system and 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria
monocytogenes amplication reagents have a “background” relative light unit (RLU) reading.
In the rare event of any unusual light output, the algorithm labels this as “Inspect.” 3M recommends the user to repeat
the assay for any Inspect samples. If the result continues to be Inspect, proceed to conrmation test using your preferred
method or as specied by local regulations
Appendix A. Protocol Interruption: Storage and re-testing of heat-treated lysates
1. To store a heat-treated lysate, re-cap the lysis tube with a clean cap (see “Lysis”, 4.5)
2. Store at 4 to 8°C for up to 72 hours.
3. Prepare a stored sample for amplication by inverting 2-3 times to mix.
4. Decap the tubes.
5. Place the mixed lysate tubes on 3M Molecular Detection Heat Block Insert and heat at 100 ±1°C for 5 ±1 minutes.
6. Remove the rack of LS tubes from the heating block and allow to cool in the 3M Molecular Detection Chill Block Insert
at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes.
7. Continue the protocol at the ‘Amplication’ section detailed above.
If you have questions about specic applications or procedures, please visit our website at www.3M.com/foodsafety or
contact your local 3M representative or distributor.
References:
1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria
monocytogenes in Foods. January 2016 Version.
2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identication of
Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples. Eective Date: May 1,
2013.
3. ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stus – Horizontal Method for the Detection and Enumeration
of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.
4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.
5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stus – General rules for microbiological examination.
6. 3M Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular
Detection System.
7. ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stus – Horizontal methods for sampling techniques from surfaces
using contact plates and swabs.
8. ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stus – Preparation of test samples, initial suspension and decimal
dilutions for microbiological examination.
9. ISO 16140-2. Microbiology of the food chain - Method validation - Part 2: Protocol for the validation of alternative
(proprietary) methods against a reference method.
Explanation of Product Label Samples
www.3M.com/foodsafety/symbols
3M Health Care
2510 Conway Ave
St. Paul, MN 55144 USA
www.3M.com/foodsafety
© 2016, 3M. All rights reserved.
3M is a trademark of 3M. Used under license in Canada.
34-8719-8292-1
3
3M Food Safety
3M United States
3M Center
Bldg. 275-5W-05
St. Paul, MN 55144-1000
USA
1-800-328-6553
3M Canada
Post Oce Box 5757
London, Ontario N6A 4T1
Canada
1-800-563-2921
3M Latin America
3M Center
Bldg. 275-5W-05
St. Paul, MN 55144-1000
USA
1-954-340-8263
3M Europe and MEA
3M Deutschland GmbH
Carl-Shurz - Strasse 1
D41453 Neuss/Germany
+49-2131-14-3000
3M United Kingdom PLC
Morley Street,
Loughborough
Leicestershire
LE11 1EP
United Kingdom
+(44) 1509 611 611
3M Österreich GmbH
Euro Plaza
Gebaude J, A-1120 Wien
Kranichberggasse 4
Austria
+(43) 1 86 686-0
3M Asia Pacic
No 1, Yishun Avenue 7
Singapore, 768923
65-64508869
3M Japan
3M Health Care Limited
6-7-29, Kita-Shinagawa
Shinagawa-ku, Tokyo
141-8684 Japan
81-570-011-321
3M Australia
Bldg A, 1 Rivett Road
North Ryde, NSW 2113
Australia
61 1300 363 878
(Français)
FR
1
3
Date de publication: 2016-10
Instructions relatives au produit
Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes version2
Description du produit et utilisation prévue
Le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M™ version2 est utilisé avec le Système de détection
moléculaire 3M™ an de détecter de manière rapide et spécique la présence d’espèces de Listeria monocytogenes dans
les aliments enrichis et les échantillons environnementaux.
Les Kits de détection moléculaire 3M utilisent la technique LAMP (loop-mediated isothermal amplication– amplication
isotherme médiée par des boucles) an d’amplier rapidement les séquences d’acide nucléique de façon extrêmement
spécique et sensible, associée à la bioluminescence pour détecter l’amplication. Les résultats présumés positifs sont
rapportés en temps réel tandis que les résultats négatifs sont achés à la n de l’essai. Les résultats présumés positifs doivent
être conrmés par les méthodes usuelles ou en fonction des méthodes spéciques répondant aux normes locales
(1, 2, 3)
.
Le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 est destiné à être utilisé au sein de laboratoires, par
des professionnels formés aux techniques s’y rapportant. 3M n’a pas étudié l’utilisation de ce produit dans des secteurs
autres que l’alimentaire et les boissons. Par exemple, 3M n’a pas documenté ce produit dans le cadre de tests sur des
échantillons d’eau ou de produits pharmaceutiques, cosmétiques, cliniques ou vétérinaires. Le Kit de détection moléculaire
Listeria monocytogenes 3M version2 na pas été évalué en utilisant tous les protocoles de test ou toutes les souches de
bactéries possibles.
Comme pour toutes les méthodes de test, la source du milieu d’enrichissement peut inuencer les résultats. Des
facteurs tels que les méthodes d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des échantillons, la manipulation
et les techniques de laboratoire peuvent également inuencer les résultats. 3M recommande l’évaluation de la
méthode comprenant le milieu d’enrichissement, dans l’environnement de l’utilisateur en utilisant un nombre susant
d’échantillons avec des aliments spéciques et des épreuves microbiennes an de garantir que la méthode répond aux
critères de l’utilisateur.
3M a évalué le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 avec un Bouillon demi-Fraser contenant
du citrate de fer ammoniacal et un Bouillon Fraser contenant du citrate de fer ammoniacal, le cas échéant. Une formulation
type de ce milieu est indiquée ci-dessous.
Formule type de la Base Bouillon demi-Fraser (g/l) Formule type de la Base Bouillon demi-Fraser (g/l)
Chlorure de sodium 20g Chlorure de sodium 20g
Phosphate de sodium dibasique anhydre * 9,6g Phosphate de sodium dibasique anhydre 9,6g
Extrait de bœuf 5,0g Extrait de bœuf 5,0g
Digestat pancréatique de caséine 5,0g Digestat pancréatique de caséine 5,0g
Digestat peptique de tissus animaux 5,0g Digestat peptique de tissus animaux 5,0g
Extrait de levure 5,0g Extrait de levure 5,0g
Chlorure de lithium 3,0g Chlorure de lithium 3,0g
Phosphate monobasique de potassium 1,35g Phosphate monobasique de potassium 1,35g
Esculine 1,0g Esculine 1,0g
Acriavine HCl 0,0125g Acriavine HCl 0,025g
Acide nalidixique 0,01g Acide nalidixique 0,02g
* Élément de substitution: Phosphate de sodium dibasique dihydraté 12,0g
Supplément pour Bouillon Fraser
(Ingrédients par acon de 10ml. Un acon est ajouté à un litre de milieu de base.)
Citrate de fer ammoniacal 0,5g/ 10ml
pH nal 7,2±0,2 à 25°C
L’Instrument de détection moléculaire 3M™ est conçu pour être utilisé avec des échantillons ayant été soumis à un
traitement thermique pendant l’étape de lyse, procédé qui détruit les organismes présents dans l’échantillon. Les
échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent être considérés
comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’Instrument de détection moléculaire 3M.
La conception et la fabrication 3M Sécurité Alimentaire sont certiées ISO (International Organization for
Standardization) 9001.
(Français)
FR
2
Le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 contient 96tests, décrits dans le tableau1.
Tableau1. Contenu du kit
Article Identication Quantité Contenu Commentaires
Tubes de solution de lyse
(LS)
Solution rose
en tubes
transparents
96 (12barrettes de
8tubes)
580l de LS par tube
Placés sur
portoir et prêts
à l’emploi
Tubes de réactif de Listeria
monocytogenes
Tubes jaunes
96 (12barrettes de
8tubes)
Mélange spécique lyophilisé
pour l’amplication et la
détection
Prêts à l’emploi
Bouchons supplémentaires
Bouchons
jaunes
96 (12barrettes de
8bouchons)
Prêts à l’emploi
Contrôle de réactif (RC)
Tubes
«Flip-Top»
transparents
16 (2poches de
8tubes individuels)
ADN témoin lyophilisé,
mélange pour l’amplication
et la détection
Prêts à l’emploi
Guide de démarrage rapide 1
Le témoin négatif, non fourni dans le kit, est un milieu d’enrichissement stérile, par exemple le Bouillon demi-Fraser. Ne pas
utiliser d’eau comme témoin négatif.
Sécurité
L’utilisateur doit lire attentivement, comprendre et respecter toutes les consignes de sécurité fournies dans le mode
d’emploi du Système de détection moléculaire 3M et du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M
version2. Conserver ces consignes de sécurité pour référence ultérieure.
AVERTISSEMENT: Indique une situation dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner un décès, des
blessures graves et/ou des dommages matériels.
MISE EN GARDE: Indique une situation dangereuse qui, si elle nest pas évitée, pourrait entraîner des blessures
mineures à modérées et/ou des dommages matériels.
AVIS: Indique une situation potentiellement dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner
des dommages matériels.
W AVERTISSEMENT
Ne pas utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 pour diagnostiquer des pathologies
chez les humains ou les animaux.
La méthode utilisant un Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 peut générer des taux de
Listeria monocytogenes susamment élevés pour provoquer la mise au monde d’un enfant mort-né ou le décès de
femmes enceintes ou de personnes immunocompromises, si ces dernières y sont exposées.
L’utilisateur doit former son personnel de manière appropriée aux techniques d’analyse actuelles: par exemple, les
bonnes pratiques de laboratoire et les normes ISO/IEC17025
(4)
, ou ISO 7218
(5)
.
An de réduire les risques associés aux faux négatifs, qui peuvent entraîner la diusion de produits contaminés:
Suivre le protocole et réaliser les analyses exactement comme indiqué dans les instructions relatives au produit.
Conserver le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version 2 conformément aux indications sur
l’emballage et aux instructions relatives au produit.
Toujours utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version 2 avant la date de péremption.
Utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version 2 avec des aliments et des échantillons
environnementaux ayant été validés en interne ou par une tierce partie.
N’utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version 2 qu’avec des surfaces, des désinfectants,
des protocoles et des souches bactériennes ayant été validés en interne ou par une tierce partie.
En cas d’échantillon environnemental contenant un tampon neutralisant avec complexe d’aryle sulfonate, eectuer une
dilution de 1:2 avant de procéder au test (1volume d’échantillon dans 1volume de bouillon d’enrichissement stérile). Une
autre possibilité consiste à transférer 10l d’enrichissement de tampon neutralisant dans les tubes de LS. Les produits
de manipulation d’échantillons 3M™ contenant un tampon neutralisant avec complexe d’aryle sulfonate sont les
suivants: BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, XSLSSL10NB, HS10NB et HS119510NB.
An de réduire les risques associés à l’exposition aux produits chimiques et aux dangers biologiques:
Il est fortement conseillé d’informer le personnel féminin du laboratoire quant au risque pour le fœtus en
développement en cas d’infection de la mère à la suite d’une exposition à la Listeria monocytogenes.
Eectuer les analyses bactériologiques dans un laboratoire doté du matériel nécessaire et sous la supervision de
professionnels qualiés.
(Français)
FR
3
Toujours respecter les consignes de sécurité standard du laboratoire, et porter des tenues et lunettes de protection
adaptées lorsque les réactifs et les échantillons contaminés sont manipulés.
Éviter tout contact avec le contenu du milieu d’enrichissement et les tubes de réactif après l’amplication.
Éliminer les échantillons enrichis conformément aux normes actuelles du secteur.
Les échantillons qui nont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent
être considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’Instrument de détection
moléculaire 3M.
An de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’essai:
Toujours porter des gants (an de protéger l’utilisateur et de prévenir l’introduction de nucléases).
An de réduire les risques de pollution environnementale:
Se conformer aux normes actuelles du secteur quant à l’élimination des déchets contaminés.
MISE EN GARDE
Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chaue.
Ne pas dépasser le temps de chaue recommandé.
Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérier la température du Support de bloc chauant pour système de
détection moléculaire 3M™ (par ex., un thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple numérique,
et non un thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du Support de bloc
chauant pour système de détection moléculaire 3M.
AVIS
An de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’essai:
Utiliser de préférence des pipettes de qualité biologie moléculaire, stériles et munies d’embouts à ltre.
Utiliser une nouvelle pipette pour chaque transfert d’échantillon.
Utiliser les bonnes pratiques de laboratoire lors du transfert de l’échantillon du milieu d’enrichissement au tube de lyse.
Pour éviter toute contamination des pipettes, l’utilisateur peut choisir d’ajouter une étape de transfert intermédiaire. Par
exemple, l’utilisateur peut transférer chaque échantillon enrichi dans un tube stérile.
Utiliser un poste de travail de biologie moléculaire disposant si possible d’une lampe germicide.
Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/fermeture,
etc.) avec une solution de 1-5% d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution d’élimination de l’ADN.
An de réduire les risques associés à un résultat faux positif:
Ne jamais ouvrir les tubes après amplication.
Toujours éliminer les tubes contaminés en les faisant tremper dans une solution d’eau de Javel à 1-5% (v:v dans l’eau)
pendant 1heure. Eectuer cette procédure à distance de la zone de préparation de l’analyse.
Consulter la Fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la réglementation
locale relative à l’élimination.
Si vous avez des questions concernant des applications ou procédures spéciques, veuillez consulter notre site Internet à
l’adresse www.3M.com/foodsafety ou contacter votre représentant ou distributeur 3M local.
Limitation de garantie/limites de recours
SAUF SI EXPRESSÉMENT ÉTABLI DANS LA SECTION DE GARANTIE LIMITÉE D’UN EMBALLAGE DE PRODUIT
INDIVIDUEL, 3M RENONCE À TOUTE GARANTIE EXPLICITE ET IMPLICITE, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER,
TOUTE GARANTIE DE COMMERCIALISATION OU D’ADAPTATION POUR UN USAGE SPÉCIFIQUE. En cas de défaut
de tout produit de Sécurité Alimentaire 3M, 3M ou son distributeur agréé s’engage, à son entière discrétion, au
remplacement ou au remboursement du prix d’achat du produit. Il s’agit de vos recours exclusifs. Tout défaut supposé
du produit devra être notié à 3M dans un délai de soixante jours et le produit renvoyé au fournisseur. Veuillez appeler
le Service clientèle (1-800-328-1671 aux États-Unis) ou votre représentant 3M en produits de microbiologie pour obtenir
une autorisation de renvoi.
Limitation de responsabilité de 3M
3M NE SERA PAS TENUE RESPONSABLE DES PERTES OU DES DOMMAGES ÉVENTUELS, QU’ILS SOIENT DIRECTS,
INDIRECTS, SPÉCIFIQUES, ACCIDENTELS OU CONSÉCUTIFS, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER, LES PERTES DE
PROFITS. En aucun cas et en aucune manière, la responsabilité de 3Ms ne sera engagée au-delà du prix d’achat du produit
prétendu défectueux.
Responsabilité de l’utilisateur
Il incombe aux clients et aux utilisateurs de connaître les instructions et les informations. Veuillez visiter notre site
www.3M.com/foodsafety pour consulter les instructions les plus récentes ou contacter votre représentant ou distributeur
3M local.
(Français)
FR
4
Lors du choix d’une méthode de test, il est important d’admettre que des facteurs externes comme les méthodes
d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des échantillons, la manipulation et les techniques de laboratoires
peuvent inuencer les résultats.
Il incombe à l’utilisateur de sélectionner une méthode d’analyse pour évaluer un nombre susant d’échantillons avec les
matrices et les épreuves microbiennes appropriées an de garantir que la méthode d’analyse réponde aux critères de
l’utilisateur.
Il incombe également à l’utilisateur de déterminer si une méthode d’analyse et ses résultats répondent aux exigences de
ses clients ou fournisseurs.
Comme avec n’importe quelle méthode de test, les résultats obtenus avec ce produit ne constituent pas une garantie de la
qualité des matrices ou des processus testés.
Dans le but d’aider les clients à évaluer la méthode pour diérentes matrices alimentaires, 3M a élaboré le kit de Contrôle
de matrice pour système de détection moléculaire 3M™. Lorsque cela est nécessaire, utiliser le Contrôle de matrice (MC)
pour déterminer si la matrice peut avoir un impact sur les résultats du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes
3M version2. Tester plusieurs échantillons représentatifs de la matrice, c.-à-d. des échantillons d’origines diérentes,
au cours de toute période de validation lors de l’adoption de la méthode 3M ou dans le cadre d’analyses de nouvelles
matrices ou de matrices inconnues ou ayant été soumises à des modications de matières premières ou de processus.
Une matrice peut être dénie comme un type de produit pourvu de propriétés intrinsèques comme sa composition et
son processus. Les diérences entre les matrices peuvent être aussi simples que les eets causés par leurs diérences de
processus ou de présentation, par exemple, cru/pasteurisé, frais/sec, etc.
Stockage et mise au rebut
Conserver le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 à une température comprise entre 2 et
8°C. Ne pas congeler. Conserver le kit à l’abri de la lumière au cours du stockage. Une fois le kit ouvert, vérier que le
sachet en aluminium est intact. Si ce sachet est endommagé, ne pas utiliser le kit. Après ouverture, les tubes de réactif
non utilisés doivent toujours être conservés dans le sachet refermable, en laissant l’agent déshydratant à l’intérieur an de
maintenir la stabilité des réactifs lyophilisés. Conserver les poches refermées à une température comprise entre 2et8°C.
Ne pas conserver plus de 60jours.
Ne pas utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 après la date de péremption. La date
de péremption et le numéro de lot sont inscrits sur l’étiquette extérieure de la boîte. Après utilisation, il est possible que les
tubes de milieu d’enrichissement et du Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 contiennent des
éléments pathogènes. Lorsque l’analyse est terminée, suivre les normes actuelles du secteur pour l’élimination des déchets
contaminés. Consulter la Fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la
réglementation locale relative à l’élimination.
Instructions d’utilisation
Suivre attentivement toutes les instructions. Le non-respect des instructions peut entraîner des résultats inexacts.
Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/fermeture, etc.)
avec une solution de 1-5% d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution d’élimination de l’ADN.
L’utilisateur doit suivre la formation de qualication d’opérateur du système de détection moléculaire 3M, mentionnée dans
le document "Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular
Detection System"
(6)
.
Voir la section "Instructions spéciques pour des méthodes validées" pour les prérequis spéciques:
Tableau3 pour les protocoles d’enrichissement selon l’AOAC
®
Ocial Method
SM
2016.08 et le AOAC Performance
Tested
SM
Certicate #081501
Tableau4 pour les protocoles d’enrichissement selon le certicat de validation NF 3M 01/15-09/16
Enrichissement de l’échantillon
Les tableaux2, 3 et 4 fournissent des indications pour l’enrichissement des échantillons alimentaires et environnementaux.
Il incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage ou des proportions de dilution diérents pour garantir
que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.
Aliments
1. Laisser le milieu d’enrichissement avec Bouillon demi-Fraser (avec citrate de fer ammoniacal) s’équilibrer à la
température ambiante du laboratoire.
2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon, conformément aux tableaux2, 3 ou 4. Pour
tous les échantillons carnés et à forte teneur en particules, il est recommandé d’utiliser des sacs avec ltre.
3. Homogénéiser soigneusement par mélange, par digestion ou à la main pendant 2±0,2minutes. Incuber à 37±1°C
conformément aux tableaux2,3 ou 4.
4. Si nécessaire (voir les tableaux2, 3 ou 4), transférer 0,1ml de l’enrichissement primaire dans 10ml de Bouillon Fraser.
Incuber à 37±1°C pendant 20 à 24heures.
(Français)
FR
5
Échantillons environnementaux
Pour prélever les échantillons, il est possible d’utiliser une éponge hydratée au moyen d’une solution neutralisante an
d’éviter les eets des produits désinfectants. 3M recommande d’utiliser une éponge en cellulose sans biocide. Pour la
solution neutralisante, vous pouvez utiliser par exemple le bouillon neutralisant (D/E) ou le bouillon Letheen Dey Engley. Il
est recommandé de désinfecter la zone après l’échantillonnage.
AVERTISSEMENT: En cas de recours à une éponge humidiée à l’aide d’un tampon neutralisant (NB) contenant un
complexe d’aryle sulfonate, diluer l’échantillon environnemental enrichi dans une dilution de 1:2 (1volume d’échantillon
pour 1volume de bouillon d’enrichissement stérile) avant l’analyse, an de réduire les risques associés aux résultats faux
négatifs, qui entraînent la libération de produits contaminés.
La zone d’échantillonnage utilisée pour vérier la présence ou non du pathogène doit faire au moins 100cm
2
(10×10cm).
Dans le cas de l’échantillonnage au moyen d’une éponge, couvrir toute la surface dans les deux sens (de gauche à droite
puis de haut en bas) ou bien prélever des échantillons environnementaux selon le protocole d’échantillonnage actuel ou
conformément aux normes du Bacteriological Analytical Manual (Manuel analytique bactériologique– BAM) de la FDA
(1)
,
au Microbiology Laboratory Guideline (Guide du laboratoire de microbiologie– MLG) du Food Safety and Inspection
Service (Service d’inspection chargé de la sécurité des produits alimentaires– FSIS) du US Department of Agriculture
(ministère de l’Agriculture des États-Unis– USDA)
(2)
ou ISO 18593
(7)
.
1. Laisser le milieu d’enrichissement avec Bouillon demi-Fraser (avec citrate de fer ammoniacal) s’équilibrer à la
température ambiante du laboratoire.
2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon, conformément aux tableaux2, 3 ou 4.
3. Homogénéiser soigneusement par mélange, par digestion ou à la main pendant 2±0,2minutes. Incuber à 37±1°C
conformément aux tableaux2, 3 ou 4.
(Français)
FR
6
Tableau2: Protocoles d’enrichissement généraux au moyen d’un enrichissement avec Bouillon demi-Fraser et avec
Bouillon Fraser à 37±1°C le cas échéant.
Matrice de
l’échantillon
Taille de
l’échantillon
Volume du
bouillon
d’enrichissement
(ml)
Durée
d’enrichissement
(h)
Viandes, volaille,
fruits de mer et
poisson soumis
à traitement
thermique, cuits
et salaisonnés
Produits laitiers
soumis à
traitement
thermique/
pasteurisés
Fruits et
légumes
Produits alimen-
taires à plusieurs
composants
25g 225 24-30
Échantillons
environnemen-
taux
(a)
1éponge 100 ou 225 24-30
1écouvillon 10 24-30
Viande crue,
volaille, fruits de
mer, poisson
25g 475 28-32
Matrice de
l’échantillon
Premier enrichissement
(Bouillon demi-Fraser)
Enrichissement
secondaire
(Bouillon Fraser)
Volume
d’échantillon
d’analyse
(a)
Taille de
l’échantillon
Volume du
bouillon
d’enrichissement
(ml)
Durée
d’enrichissement
(h)
Taille de
l’échantillon
Durée
d’enrichissement
(h)
Produits laitiers
crus
25g 225 20-24
Transférer
0,1ml dans
10ml de
Bouillon
Fraser
20-24 10l
(a) Volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse. Se référer à l’étape4.6 de la section Lyse.
Instructions spéciques pour des méthodes validées
AOAC
®
Ocial Method
SM
2016.08
AOAC Performance Tested Method
SM
# 081501
Lors d’études AOAC et PTM, le Kit de détection moléculaire Listeria monocytogenes 3M version2 sest révélé être une
méthode ecace pour la détection d’espèces de Listeria monocytogenes. Les matrices testées dans l’étude sont présentes
dans le tableau3.
(Français)
FR
7
Tableau3. Protocoles d’enrichissement selon l’AOAC Ocial Method
SM
2016.08 et le Performance Tested
SM
Certicate
#081501.
Matrice de l’échantillon
Taille de
l’échantillon
Volume du bouillon d’enrichissement (ml) Durée d’enrichissement (h)
Hot dogs au bœuf,
queso fresco (fromage
frais), glace à la vanille,
fromage blanc 4% de
matière grasse laitière,
lait entier chocolaté 3%,
laitue romaine, sachet
d’épinards crus, saumon
fumé à froid
25g 225 24-30
Poulet cru 25g 475 28-32
Dinde de charcuterie 125g 1125 24-30
Cantaloup Melon entier
Assez de volume pour permettre au melon
de otter
26-30
Échantillons
environnementaux:
Acier
inoxydable
1éponge 225 24-30
Béton scellé 1éponge 100 24-30
Plastique 1écouvillon 10 24-30
Validation NF par certication AFNOR
3M 01/15-09/16
Alternative Analytical Methods for Agribusiness
http://nf-validation.afnor.org/en
Pour plus d’informations sur la n de validité, veuillez vous référer au certicat de VALIDATION NF disponible à l’adresse
mentionnée ci-dessus.
Méthode certiée de la validation NF en conformité avec ISO16140
(9)
en comparaison à ISO11290
(3)
Champ d’application de la validation: Tous les aliments à destination des humains et échantillons environnementaux (sauf
échantillons de production primaire)
Préparation de l’échantillon: Les échantillons doivent être préparés selon les normes EN ISO11290
(3)
and EN ISO6887
(8)
Version du logiciel: Voir le certicat
(Français)
FR
8
Tableau4: Protocoles d’enrichissement selon la méthode certiée de validation NF 3M 01/15-09/16.
Protocole
général
Taille de
l’échant-
illon
Volume
du
bouillon
d’enrich-
issement
(ml)
Tem-
pérature
d’enrich-
issement
(±1°C)
Durée
d’enrich-
issement
(h)
Volume
d’échant-
illon
d’analyse
(a)
Point
d’interruption
recommandé
Tous les
échantillons
alimentaires
(sauf les
viandes
crues, les
fruits de
mer crus et
les produits
laitiers crus)
25g
225 37 24-30 20µl
- Demi-Fraser
pendant
72heures
maximum
- lysate à
-20°C,
- lysat 4°C
pendant
72heures
maximum
Échantillons
environne-
mentaux
25g,
1écouvillon,
ou 1chion
Protocole
spécique
Premier enrichissement (Bouillon demi-
Fraser)
Second enrichissement (Bouillon Fraser)
Taille de
l’échant-
illon
Volume
du
bouillon
d’enrich-
issement
(ml)
Tem-
pérature
d’enrich-
issement
(±1°C)
Durée
d’enrich-
issement
(h)
Taille de
l’échant-
illon
Température
d’enrich-
issement
(±1°C)
Durée
d’enrich-
issement
(h)
Volume
d’échant-
illon
d’analyse
(a)
Point
d’interruption
recommandé
Viandes
crues, fruits
de mer crus
et produits
laitiers crus
25g 225 37 20-24
Transférer
0,1ml dans
10ml de
Bouillon
Fraser
37 20-24 10µl
- Demi-Fraser
pendant
72heures
maximum
- lysat à
-20°C,
- lysat 4°C
pendant
72heures
maximum
(a) Volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse. Se référer à l’étape4.6 de la section Lyse.
Remarque
Les échantillons de plus de 25g nont pas été testés dans l’étude de validation NF.
Préparation du Plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M™
1. Humidier un chion avec une solution d’eau de Javel à 1-5% (v:v dans l’eau) et essuyer le Plateau de chargement
rapide pour système de détection moléculaire 3M™.
2. Rincer le Plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M à l’eau.
3. Utiliser un chion jetable pour sécher le Plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M.
4. S’assurer que le Plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M est sec avant toute
utilisation.
Préparation du Support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M™
Placer le Bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M™ sur le plan de travail du laboratoire (le Plateau
de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M™ n’est pas utilisé). Utiliser le bloc refroidissant à la
température ambiante du laboratoire (20-25°C).
Préparation du Support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M™
Placer le Support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M™ dans une unité de traitement thermique
à sec. Allumer l’unité de traitement thermique à sec et régler la température an que le Support de bloc chauant pour
système de détection moléculaire 3M atteigne et conserve une température de 100±1°C.
  • Page 1 1
  • Page 2 2
  • Page 3 3
  • Page 4 4
  • Page 5 5
  • Page 6 6
  • Page 7 7
  • Page 8 8
  • Page 9 9
  • Page 10 10
  • Page 11 11
  • Page 12 12
  • Page 13 13
  • Page 14 14
  • Page 15 15
  • Page 16 16
  • Page 17 17
  • Page 18 18
  • Page 19 19
  • Page 20 20
  • Page 21 21
  • Page 22 22
  • Page 23 23
  • Page 24 24
  • Page 25 25
  • Page 26 26
  • Page 27 27
  • Page 28 28
  • Page 29 29
  • Page 30 30
  • Page 31 31
  • Page 32 32
  • Page 33 33
  • Page 34 34
  • Page 35 35
  • Page 36 36
  • Page 37 37
  • Page 38 38
  • Page 39 39
  • Page 40 40
  • Page 41 41
  • Page 42 42
  • Page 43 43
  • Page 44 44
  • Page 45 45
  • Page 46 46
  • Page 47 47
  • Page 48 48
  • Page 49 49
  • Page 50 50
  • Page 51 51
  • Page 52 52
  • Page 53 53
  • Page 54 54
  • Page 55 55
  • Page 56 56
  • Page 57 57
  • Page 58 58
  • Page 59 59
  • Page 60 60
  • Page 61 61
  • Page 62 62
  • Page 63 63
  • Page 64 64
  • Page 65 65
  • Page 66 66
  • Page 67 67
  • Page 68 68
  • Page 69 69
  • Page 70 70
  • Page 71 71
  • Page 72 72
  • Page 73 73
  • Page 74 74
  • Page 75 75
  • Page 76 76
  • Page 77 77
  • Page 78 78
  • Page 79 79
  • Page 80 80
  • Page 81 81
  • Page 82 82
  • Page 83 83
  • Page 84 84
  • Page 85 85
  • Page 86 86
  • Page 87 87
  • Page 88 88
  • Page 89 89
  • Page 90 90
  • Page 91 91
  • Page 92 92
  • Page 93 93
  • Page 94 94
  • Page 95 95
  • Page 96 96
  • Page 97 97
  • Page 98 98
  • Page 99 99
  • Page 100 100
  • Page 101 101
  • Page 102 102
  • Page 103 103
  • Page 104 104
  • Page 105 105
  • Page 106 106
  • Page 107 107
  • Page 108 108
  • Page 109 109
  • Page 110 110
  • Page 111 111
  • Page 112 112
  • Page 113 113
  • Page 114 114
  • Page 115 115
  • Page 116 116
  • Page 117 117
  • Page 118 118
  • Page 119 119
  • Page 120 120
  • Page 121 121
  • Page 122 122
  • Page 123 123
  • Page 124 124
  • Page 125 125
  • Page 126 126
  • Page 127 127
  • Page 128 128
  • Page 129 129
  • Page 130 130
  • Page 131 131
  • Page 132 132
  • Page 133 133
  • Page 134 134
  • Page 135 135
  • Page 136 136
  • Page 137 137
  • Page 138 138
  • Page 139 139
  • Page 140 140
  • Page 141 141
  • Page 142 142
  • Page 143 143
  • Page 144 144
  • Page 145 145
  • Page 146 146
  • Page 147 147
  • Page 148 148
  • Page 149 149
  • Page 150 150
  • Page 151 151
  • Page 152 152
  • Page 153 153
  • Page 154 154
  • Page 155 155
  • Page 156 156
  • Page 157 157
  • Page 158 158
  • Page 159 159
  • Page 160 160
  • Page 161 161
  • Page 162 162
  • Page 163 163
  • Page 164 164
  • Page 165 165
  • Page 166 166
  • Page 167 167
  • Page 168 168
  • Page 169 169
  • Page 170 170
  • Page 171 171
  • Page 172 172
  • Page 173 173
  • Page 174 174
  • Page 175 175
  • Page 176 176
  • Page 177 177
  • Page 178 178
  • Page 179 179
  • Page 180 180
  • Page 181 181
  • Page 182 182
  • Page 183 183
  • Page 184 184
  • Page 185 185
  • Page 186 186
  • Page 187 187
  • Page 188 188
  • Page 189 189
  • Page 190 190
  • Page 191 191
  • Page 192 192
  • Page 193 193
  • Page 194 194
  • Page 195 195
  • Page 196 196
  • Page 197 197
  • Page 198 198
  • Page 199 199
  • Page 200 200
  • Page 201 201
  • Page 202 202
  • Page 203 203
  • Page 204 204
  • Page 205 205
  • Page 206 206
  • Page 207 207
  • Page 208 208
  • Page 209 209
  • Page 210 210
  • Page 211 211
  • Page 212 212
  • Page 213 213
  • Page 214 214
  • Page 215 215
  • Page 216 216
  • Page 217 217
  • Page 218 218
  • Page 219 219
  • Page 220 220
  • Page 221 221
  • Page 222 222
  • Page 223 223
  • Page 224 224
  • Page 225 225
  • Page 226 226
  • Page 227 227
  • Page 228 228
  • Page 229 229
  • Page 230 230
  • Page 231 231
  • Page 232 232
  • Page 233 233
  • Page 234 234
  • Page 235 235
  • Page 236 236
  • Page 237 237
  • Page 238 238
  • Page 239 239
  • Page 240 240
  • Page 241 241
  • Page 242 242
  • Page 243 243
  • Page 244 244
  • Page 245 245
  • Page 246 246
  • Page 247 247
  • Page 248 248

3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria monocytogenes MDA2LMO96, 96 tests, 1 ea 取扱説明書

タイプ
取扱説明書