3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria MDA2LIS96, 96 tests, 1 ea 取扱説明書

Listeria

2

Product Instructions

MDA2LIS96

Molecular Detection Assay 2 - Listeria

Kit de détection moléculaire Listeria sp version 2

Molekulare Detektion 2 – Listerien Nachweis

Analisi molecolare per il rilevamento dellaListeria

Ensayo de Detección Molecular 2 para Listeria

Moleculair detectie assay 2 Listeria

Molecular Detection Assay 2 – Listeria

Molekylær Detektions Analyse 2 Listeria

Molekylær deteksjonstest 2 for Listeria

Molekyläärinen testisetti 2 - Listeria

Ensaio para Detecção Molecular de Listeria 2

Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης Listeria 2

Molekularny test do wykrywania 2 – Listeria

Молекулярный анализ 2- Listeria

Moleküler Tayin Testi Listeri-2

分子検出アッセイ2　

リステリア属菌

李斯特菌分子检测分析 2 -

李斯特菌

(Simplied)

分子檢測套組 2 -

李斯特菌

(Traditional)

ชุดทดสอบเชื้อ

ลีสทีเรีย

ระดับโมเลกุล2

󻉓󻱟󽴔󺅏󼉫󽴔󼕳󼞇

󺹻󻝳󼘛󺹻󻨓󻭸

Deteksi Molekuler Untuk Pengujian Listeria 2

EN

FR

DE

IT

ES

NL

SV

DA

NO

FI

PT

EL

PL

RU

TR

JA

ZH

TH

KO

ID

2

(English)

EN

3

Issue Date: 2016-08

Product Instructions

Molecular Detection Assay 2 - Listeria

Product Description and Intended Use

3M™ Molecular Detection Assay 2 - Listeria is used with the 3M™ Molecular Detection System for the rapid and specic

detection of Listeria species in enriched food and environmental samples.

The 3M Molecular Detection Assays use loop-mediated isothermal amplication to rapidly amplify nucleic acid sequences

with high specicity and sensitivity, combined with bioluminescence to detect the amplication. Presumptive positive

results are reported in real-time while negative results are displayed after the assay is completed. Presumptive positive

results should be conrmed using your preferred method or as specied by local regulations

(1, 2, 3)

.

The 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria is intended for use in a laboratory environment by professionals trained

in laboratory techniques. 3M has not documented the use of this product in industries other than food or beverage. For

example, 3M has not documented this product for testing water, pharmaceutical, cosmetics, clinical or veterinary samples.

The 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria has not been evaluated with all possible testing protocols or with all

possible strains of bacteria.

As with all test methods, the source, formulation and quality of enrichment medium can inuence the results. Factors

such as sampling methods, testing protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may also inuence

results. 3M recommends evaluation of the method including enrichment medium, in the user’s environment using a

sucient number of samples with particular foods and/or environmental samples and microbial challenges to ensure that

the method meets the user’s criteria.

3M has evaluated the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria with Demi-Fraser Broth and Fraser Broth containing Ferric

Ammonium Citrate. A typical formulation of these media follows below.

Demi-Fraser Broth Base Typical Formula (g/L) Fraser Broth Base Typical Formula (g/L)

Sodium Chloride 20 g Sodium Chloride 20 g

Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous * 9.6 g Sodium Phosphate, dibasic, anhydrous 9.6 g

Beef Extract 5.0 g Beef Extract 5.0 g

Pancreatic Digest of Casein 5.0 g Pancreatic Digest of Casein 5.0 g

Peptic Digest of Animal Tissue 5.0 g Peptic Digest of Animal Tissue 5.0 g

Yeast Extract 5.0 g Yeast Extract 5.0 g

Lithium Chloride 3.0 g Lithium Chloride 3.0 g

Potassium Phosphate, monobasic 1.35 g Potassium Phosphate, monobasic 1.35 g

Esculin 1.0 g Esculin 1.0 g

Acriavin HCl 0.0125 g Acriavin HCl 0.025 g

Nalidixic Acid 0.01 g Nalidixic Acid 0.02 g

* Substitute: Sodium Phosphate, dibasic, dihydrate 12.0 g

Fraser Broth Supplement

(Ingredients per 10 mL vial. One vial is added to one liter of basal medium.)

Ferric Ammonium Citrate 0.5 g/10 mL

Final pH 7.2 ± 0.2 at 25°C

The 3M™ Molecular Detection Instrument is intended for use with samples that have undergone heat treatment during

the assay lysis step, which is designed to destroy organisms present in the sample. Samples that have not been properly

heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard and should NOT be inserted into the 3M

Molecular Detection Instrument.

3M Food Safety is certied to ISO (International Organization for Standardization) 9001 for design and manufacturing.

The 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria test kit contains 96 tests, described in Table 1.

3

(English)

EN

Table 1. Kit Components

Item Identication Quantity Contents Comments

Lysis Solution

(LS) tubes

Pink solution in clear

tubes

96

(12 strips of 8 tubes)

580 L of LS per tube

Racked and

ready to use

Listeria Reagent tubes Blue tubes

96

(12 strips of 8 tubes)

Lyophilized specic

amplication and

detection mix

Ready to use

Extra caps Blue caps 96 (12 strips of 8 caps) Ready to use

Reagent Control (RC) Clear ip-top tubes

16 (2 pouches of

8 individual tubes)

Lyophilized control

DNA, amplication

and detection mix

Ready to use

Quick Start Guide

1

The Negative Control, not provided in the kit, is sterile enrichment medium, e.g., Demi-Fraser Broth. Do not use water as a

Negative Control.

Safety

The user should read, understand and follow all safety information in the instructions for the 3M Molecular Detection

System and the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria. Retain the safety instructions for future reference.

WARNING: Indicates a hazardous situation, which, if not avoided, could result in death or serious injury and/or property

damage.

CAUTION: Indicates a hazardous situation, which, if not avoided, could result in minor or moderate injury and/or

property damage.

NOTICE: Indicates a potentially hazardous situation which, if not avoided, could result in property damage.

W WARNING

Do not use the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria in the diagnosis of conditions in humans or animals.

The 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria method may generate Listeria monocytogenes to levels sucient to

cause stillbirths and fatalities in pregnant women and the immunocompromised, if exposed.

The user must train its personnel in current proper testing techniques: for example, Good Laboratory Practices, ISO/

IEC 17025

(4)

, or ISO 7218

(5)

.

To reduce the risks associated with a false-negative result leading to the release of contaminated product:

• Follow the protocol and perform the tests exactly as stated in the product instructions.

• Store the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria as indicated on the package and in the product instructions.

• Always use the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria by the expiration date.

• Use the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria for food and environmental samples that have been validated

internally or by a third party.

• Use the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria only for surfaces, sanitizers, protocols and bacterial strains that have

been validated internally or by a third party.

• For an environmental sample containing Neutralizing Buer with aryl sulfonate complex, perform a 1:2 dilution before

testing (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth). Another option is to transfer 10 L of the NB enrichment

into the LS tubes. 3M™ sample handling products which include Neutralizing Buer with aryl sulfonate complex:

BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, XSLSSL10NB, HS10NB and HS119510NB.

To reduce the risks associated with exposure to chemicals and biohazards:

• It is strongly recommended that female laboratory sta be informed of the risk to a developing fetus resulting from

infection of the mother through exposure to Listeria monocytogenes.

• Perform pathogen testing in a properly equipped laboratory under the control of trained personnel.

• Always follow standard laboratory safety practices, including wearing appropriate protective apparel and eye

protection while handling reagents and contaminated samples.

• Avoid contact with the contents of the enrichment media and reagent tubes after amplication.

• Dispose of enriched samples according to current local/regional/national regulation and industry standards.

• Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard

and should NOT be inserted into the 3M Molecular Detection Instrument.

To reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:

• Always wear gloves (to protect the user and prevent introduction of nucleases).

4

(English)

EN

CAUTION

• Do not exceed the recommended temperature setting on heater.

• Do not exceed the recommended heating time.

• Use an appropriate, calibrated thermometer to verify the 3M™ Molecular Detection Heat Block Insert temperature

(e.g., a partial immersion thermometer or digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer.) The

thermometer must be placed in the designated location in the 3M Molecular Detection Heat Block Insert.

NOTICE

To reduce the risks associated with cross-contamination, including false-positive results:

• Use of sterile, aerosol barrier (ltered), molecular biology grade pipette tips is recommended.

• Use a new pipette tip for each sample transfer.

• Use Good Laboratory Practices to transfer the sample from the enrichment to the lysis tube. To avoid pipettor

contamination, the user may choose to add an intermediate transfer step. For example, the user can transfer each

enriched sample into a sterile tube.

• Use a molecular biology workstation containing germicidal lamp where available.

• Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1- 5% (v:v in

water) household bleach solution or DNA removal solution.

To reduce the risks associated with a false-positive result:

• Never open reagent tubes post amplication.

• Always dispose of the contaminated tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour and

away from the assay preparation area.

Consult the Safety Data Sheet for additional information and local regulations for disposal.

If you have questions about specic applications or procedures, please visit our website at www.3M.com/foodsafety or

contact your local 3M representative or distributor.

Limitation of Warranties / Limited Remedy

EXCEPT AS EXPRESSLY STATED IN A LIMITED WARRANTY SECTION OF INDIVIDUAL PRODUCT PACKAGING, 3M

DISCLAIMS ALL EXPRESS AND IMPLIED WARRANTIES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO, ANY WARRANTIES

OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR USE. If any 3M Food Safety Product is defective, 3M or its

authorized distributor will, at its option, replace or refund the purchase price of the product. These are your exclusive

remedies. You must promptly notify 3M within sixty days of discovery of any suspected defects in a product and return

it to 3M. Please call Customer Service (1-800-328-1671 in the U.S.) or your ocial 3M Food Safety representative for a

Returned Goods Authorization.

Limitation of 3M Liability

3M WILL NOT BE LIABLE FOR ANY LOSS OR DAMAGES, WHETHER DIRECT, INDIRECT, SPECIAL, INCIDENTAL OR

CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO LOST PROFITS. In no event shall 3M’s liability under

any legal theory exceed the purchase price of the product alleged to be defective.

User Responsibility

Users are responsible for familiarizing themselves with product instructions and information. Visit our website at

www.3M.com/foodsafety, or contact your local 3M representative or distributor for more information.

When selecting a test method, it is important to recognize that external factors such as sampling methods, testing

protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may inuence results.

It is the user’s responsibility in selecting any test method or product to evaluate a sucient number of samples with the

appropriate matrices and microbial challenges to satisfy the user that the chosen test method meets the user’s criteria.

It is also the user’s responsibility to determine that any test methods and results meet its customers’ and suppliers’

requirements.

As with any test method, results obtained from use of any 3M Food Safety product do not constitute a guarantee of the

quality of the matrices or processes tested.

To help customers evaluate the method for various food matrices, 3M has developed the 3M™ Molecular Detection

Matrix Control kit. When needed, use the Matrix Control (MC) to determine if the matrix has the ability to impact the 3M

Molecular Detection Assay 2 - Listeria results. Test several samples representative of the matrix, i.e. samples obtained from

dierent origin, during any validation period when adopting the 3M method or when testing new or unknown matrices or

matrices that have undergone raw material or process changes.

A matrix can be dened as a type of product with intrinsic properties such as composition and process. Dierences

between matrices may be as simple as the eects caused by dierences in their processing or presentation for example,

raw vs. pasteurized; fresh vs. dried, etc.

5

(English)

EN

Storage and Disposal

Store the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria at 2-8°C. Do not freeze. Keep kit away from light during storage.

After opening the kit, check that the foil pouch is undamaged. If the pouch is damaged, do not use. After opening, unused

reagent tubes should always be stored in the re-sealable pouch with the desiccant inside to maintain stability of the

lyophilized reagents. Store resealed pouches at 2-8°C for no longer than 60 days.

Do not use 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria past the expiration date. Expiration date and lot number are noted

on the outside label of the box. After use, the enrichment medium and the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria tubes

can potentially contain pathogenic materials. When testing is complete, follow current industry standards for the disposal

of contaminated waste. Consult the Safety Data Sheet for additional information and local regulations for disposal.

Instructions for Use

Follow all instructions carefully. Failure to do so may lead to inaccurate results.

The user should complete the 3M Molecular Detection System operator qualication training, as described in the

“Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular Detection

System” document

(6)

.

Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1- 5% (v:v in water)

household bleach solution or DNA removal solution.

See Section “Specic Instructions for validated methods“ for specic requirements:

Table 3 for enrichment protocols according to AOAC

®

Ocial Method

SM

2016.07 and Performance Tested

SM

Certicate

#111501

Table 4 for enrichment protocols according to NF Validation certicate 3M 01/14-05/16

Sample Enrichment

Tables 2, 3 or 4 present guidance for the enrichment of food and environmental samples. It is the user’s responsibility to

validate alternate sampling protocols or dilution ratios to ensure this test method meets the user’s criteria.

Foods

1. Allow the Demi-Fraser Broth enrichment medium (includes ferric ammonium citrate) to equilibrate to ambient laboratory

temperature.

2. Aseptically combine the enrichment medium and sample according to Tables 2, 3 or 4. For all meat and highly

particulate samples, the use of lter bags is recommended.

3. Homogenize thoroughly by blending, stomaching, hand mixing for 2 ±0.2 minutes. Incubate at 37 ±1°C according to

Tables 2, 3 or 4.

4. For raw dairy products, transfer 0.1 mL of the primary enrichment into 10 mL of Fraser Broth. Incubate at 37 ±1°C for

20-24 hours.

Environmental samples

Sample collection devices can be a sponge hydrated with a neutralizing solution to inactivate the eects of the sanitizers.

3M recommends the use of a biocide-free cellulose sponge. Neutralizing solution can be Dey-Engley (D/E) Neutralizing

Broth or Letheen broth. It is recommended to sanitize the area after sampling.

WARNING: Should you select to use Neutralizing Buer (NB) that contains aryl sulfonate complex as the hydrating

solution for the sponge, it is required to perform a 1:2 dilution (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth) of the

enriched environmental sample before testing in order to reduce the risks associated with a false-negative result leading

to the release of contaminated product.

The recommended size of the sampling area to verify the presence or absence of the pathogen on the surface is at least

100 cm

2

(10 cm x 10 cm or 4”x4”). When sampling with a sponge, cover the entire area going in two directions (left to right

then up and down) or collect environmental samples following your current sampling protocol or according to the FDA

BAM

(1)

, USDA FSIS MLG

(2)

or ISO 18593

(7)

guidelines.

1. Allow the Demi-Fraser Broth enrichment medium (includes ferric ammonium citrate) to equilibrate to ambient laboratory

temperature.

2. Aseptically combine the enrichment medium and sample according to Tables 2, 3 or 4.

3. Homogenize thoroughly by blending, stomaching, hand mixing or vortexing for 2 ±0.2 minutes. Incubate at 37 ±1°C for

24-30 hours according to Tables 2, 3 or 4.

6

(English)

EN

Table 2: General enrichment protocols using Demi-Fraser Broth Enrichment at 37 ±1°C and Fraser Broth as needed.

Sample

Matrix

Sample

Size

Enrichment

Broth

Volume

(mL)

Enrichment

Temperature

(±1°C)

Enrichment

Time (hr)

Heat-

processed,

cooked,

cured meats,

poultry,

seafood and

sh

Heat-

processed /

pasteurized

dairy products

Produce and

vegetables

Multi-

component

foods

25 g 225 37 24-30

Environmental

samples

1 sponge 100 or 225 37 24-30

1 swab 10 37 24-30

Raw meat,

poultry,

seafood, sh

25 g 475 37 28-32

Sample

Matrix

Primary Enrichment (Demi-Fraser Broth)

(a)

Secondary Enrichment (Fraser

Broth)

(a)

Sample

Analysis

Volume

(b)

Sample

Size

Enrichment

Broth

Volume

(mL)

Enrichment

Temperature

(±1°C)

Enrichment

Time (hr)

Sample

Size

Enrichment

Temperature

(±1°C)

Enrichment

Time (hr)

Raw dairy

products

25 g 225 37 20-24

Transfer

0.1 mL

into

10 mL

Fraser

Broth

37 20-24 10 L

(a) Demi-Fraser and Fraser broth should always be supplemented with Fraser Broth supplement (ferric ammonium citrate)

during primary or secondary enrichment.

(b) Volume of sample transferred to Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.6 of Lysis section.

Specic Instructions for Validated Methods

AOAC® Ocial Method

SM

2016.07

AOAC® Performance Tested Method

SM

#111501

In AOAC OMA and PTM studies, the3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria was found to be an eective method for

the detection of Listeria species. The matrices tested in the study are shown in Table 3.

7

(English)

EN

Table 3. Enrichment protocols using Demi-Fraser Broth

(a)

at 37 ± 1°C according to AOAC Ocial Methods

SM

2016.07 and

Performance Tested

SM

Certicate #111501

Sample Matrix Sample Size Enrichment Broth Volume (mL) Enrichment Time (hr)

Beef hot dogs, Queso Fresco, Vanilla Ice

Cream, 4% Milk Fat Cottage Cheese,

3% chocolate whole milk, romaine

lettuce, bagged raw spinach, cold

smoked salmon

25 g 225 24-30

Raw chicken 25 g 475 28-32

Deli turkey 125 g 1125 24-30

Cantaloupe

(b)

Whole melon Enough volume to allow melon to oat 26-30

Environmental

samples:

Stainless steel 1 sponge 225 24-30

Sealed concrete 1 sponge 100 24-30

Plastic

(c)

1 swab 10 24-30

All samples for the AOAC validation were homogenized by stomaching unless otherwise noted.

(a) Demi-Fraser and Fraser broth should always be supplemented with Fraser Broth supplement (ferric ammonium citrate)

during primary or secondary enrichment.

(b) Homogenize sample by hand mixing.

(c) Homogenize sample by vortexing.

NF Validation by AFNOR Certication

3M 01/14-05/16

Alternative Analytical Methods for Agribusiness

http://nf-validation.afnor.org/en

For more information about end of validity, please refer to NF Validation certicate available on the website mentioned

above.

NF Validation certied method in compliance with ISO 16140-2

(8)

in comparison to ISO 11290-1

(3)

Scope of the validation: All human food and environmental samples (excluding primary production samples)

Sample preparation: Samples should be prepared according to EN ISO 11290-1

(3)

and EN ISO 6887

(9)

Software version: See certicate

8

(English)

EN

Table 4. Enrichment protocols according to NF VALIDATION certied method 3M 01/14-05/16.

General

Protocol

Sample

Size

Enrichment

Broth

Volume

(mL)

Enrichment

Tempera-

ture

(±1°C)

Enrichment

Time (hr)

Sample

Analysis

Volume

(a)

Recom-

mended

Interruption

Point

All food

samples

(excepted

raw

meats,

raw

seafood

and raw

dairy

products)

25 g 225 37 24-30 20 µL

• DF broth

up to

72 hr

• lysate at

-20°C

• lysate at

4°C up to

72 hr

Environ-

mental

samples

25 g,

1 swab,

or 1

wipe

225 37 24-30 20 µL

• lysate at

-20°C

Specic

Protocol 1

Sample

Size

Enrichment

Broth

Volume

(mL)

Enrichment

Tempera-

ture

(±1°C)

Enrichment

Time (hr)

Sample

Analysis

Volume

(a)

(µL)

Recom-

mended

Interruption

Point

Raw

meats

and raw

seafood

25 g 475 37 28-32 20 µL

• DF broth

up to

72 hr

• lysate at

-20°C

• lysate at

4°C up to

72 hr

Specic

Protocol 2

Primary Enrichment (Demi-Fraser Broth)

(b)

Secondary Enrichment (Fraser Broth)

(b)

Sample

Size

Enrichment

Broth

Volume

(mL)

Enrichment

Tempera-

ture

(±1°C)

Enrichment

Time (hr)

Sample

Size

Enrichment

Tempera-

ture

(±1°C)

Enrichment

Time (hr)

Sample

Analysis

Volume

(c)

Recom-

mended

Interruption

Point

Raw dairy

products

25 g 225 37 20-24

Tranfer

0.1 mL

into

10 mL

Fraser

Broth

37 20-24 10 µL

• DF broth

up to

72 hr

• lysate at

-20°C

(a) Volume of sample transferred to Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.6 of Lysis section.

(b) Demi-Fraser and Fraser broth should always be supplemented with Fraser Broth supplement (ferric ammonium citrate)

during primary or secondary enrichment.

(c) Volume of sample transferred to Lysis Solution tubes. Refer to Step 4.6 of Lysis section.

Note: Samples larger than 25 g have not been tested in the NF validation study.

Preparation of the 3M™ Molecular Detection Speed Loader Tray

1. Wet a cloth with a 1-5% (v:v in water) household bleach solution and wipe the 3M Molecular Detection Speed Loader

Tray.

2. Rinse the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray with water.

3. Use a disposable towel to wipe the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray dry.

4. Ensure the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray is dry before use.

9

(English)

EN

Preparation of the 3M™ Molecular Detection Chill Block Insert

Place the 3M Molecular Detection Chill Block directly on the laboratory bench; (the 3M™ Molecular Detection Chill Block

Tray is not used). Use the chill block at ambient laboratory temperature (20-25°C).

Preparation of the 3M™ Molecular Detection Heat Block Insert

Place the 3M Molecular Detection Heat Block Insert in a dry double block heater unit. Turn on the dry block heater unit and

set the temperature to allow the 3M Molecular Detection Heat Block Insert to reach and maintain a temperature of

100 ±1°C.

Note: Depending on the heater unit, allow approximately 30 minutes for the 3M Molecular Detection Heat Block Insert

to reach temperature. Using an appropriate, calibrated thermometer (e.g., a partial immersion thermometer or digital

thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer) placed in the designated location, verify that the 3M

Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ±1°C.

Preparation of the 3M Molecular Detection Instrument

1. Launch the 3M™ Molecular Detection Software and log in. Contact your 3M Food Safety representative to ensure you

have the most updated version of the software.

2. Turn on the 3M Molecular Detection Instrument.

3. Create or edit a run with data for each sample. Refer to the 3M Molecular Detection System User Manual for details.

Note: The 3M Molecular Detection Instrument must reach and maintain temperature of 60°C before inserting the 3M

Molecular Detection Speed Loader Tray with reaction tubes. This heating step takes approximately 20 minutes and is

indicated by an ORANGE light on the instrument’s status bar. When the instrument is ready to start a run, the status bar

will turn GREEN.

Lysis

1. Allow the lysis solution (LS) tubes to warm up by setting the rack at room temperature (20-25°C) overnight (16-18

hours). Alternatives to equilibrate the LS tubes to room temperature are to set the LS tubes on the laboratory bench for

at least 2 hours, incubate the LS tubes in a 37 ±1°C incubator for 1 hour or place them in a dry double block heater for 30

seconds at 100°C.

2. Invert the capped tubes to mix. Proceed to next step within 4 hours.

3. Remove the enrichment broth from the incubator.

4. One LS tube is required for each sample and the Negative Control (NC) (sterile enrichment medium) sample.

4.1 LS tube strips can be cut to desired LS tube number. Select the number of individual LS tubes or 8-tube strips

needed. Place the LS tubes in an empty rack.

4.2 To avoid cross-contamination, decap one LS tubes strip at a time and use a new pipette tip for each transfer step.

4.3 Transfer enriched sample to LS tubes as described below:

Transfer each enriched sample into an individual LS tube rst. Transfer the NC last.

4.4 Use the 3M™ Molecular Detection Cap/Decap Tool-Lysis to decap one LS tube strip – one strip at a time.

4.5 Discard the LS tube cap – if lysate will be retained for retest, place the caps into a clean container for

re-application after lysis. For processing of retained lysate, see Appendix A.

4.6 Transfer 20 µL of sample into a LS tube unless otherwise indicated in Protocol Tables 2, 3, and 4 (e.g., raw dairy

products use 10 µL).

5. Repeat step 4.2 until each individual sample has been added to a corresponding LS tube in the strip.

20 µl

6. Repeat steps 4.1 to 4.6 as needed, for the number of samples to be tested.

7. When all samples have been transferred, transfer 20 µL of NC (sterile enrichment medium, e.g., Demi-Fraser Broth) into

a LS tube. Do not use water as a NC.

8. Verify that the temperature of the 3M Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ±1°C.

10

(English)

EN

9. Place the uncovered rack of LS tubes in the 3M Molecular Detection Heat Block Insert and heat for 15 ±1 minutes.

During heating, the LS solution will change from pink (cool) to yellow (hot).

Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard

and should NOT be inserted into the 3M Molecular Detection Instrument.

10. Remove the uncovered rack of LS tubes from the heating block and allow to cool in the 3M Molecular Detection Chill

Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes. The 3M Molecular Detection Chill Block Insert, used at

ambient temperature without the 3M Molecular Detection Chill Block Tray should sit directly on the laboratory bench.

When cool, the lysis solution will revert to a pink color.

11. Remove the rack of LS tubes from the 3M Molecular Detection Chill Block Insert.

00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplication

1. One Reagent tube is required for each sample and the NC.

1.1 Reagent tube strips can be cut to desired tube number. Select the number of individual Reagent tubes or 8-tube

strips needed.

1.2 Place Reagent tubes in an empty rack.

1.3 Avoid disturbing the reagent pellets from the bottom of the tubes.

2. Select 1 Reagent Control (RC) tube and place in rack.

3. To avoid cross-contamination, decap one Reagent tube strip at a time and use a new pipette tip for each transfer step.

4. Transfer lysate to Reagent tubes and RC tube as described below:

Transfer each sample lysate into individual Reagent tubes rst followed by the NC. Hydrate the RC tube last.

5. Use the 3M™ Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to decap the Reagent tubes –one Reagent tube strip at a

time. Discard cap.

5.1 Transfer 20 µL of Sample lysate from the upper ½ of the liquid (avoid precipitate) in the LS tube into

corresponding Reagent tube. Dispense at an angle to avoid disturbing the pellets. Mix by gently pipetting up

and down 5 times.

5.2 Repeat step 5.1 until individual Sample lysate has been added to a corresponding Reagent tube in the strip.

5.3 Cover the Reagent tubes with the provided extra caps and use the rounded side of the 3M Molecular Detection

Cap/Decap Tool-Reagent to apply pressure in a back and forth motion ensuring that the cap is tightly applied.

5.4 Repeat step 5.1 as needed, for the number of samples to be tested.

5.5 When all sample lysates have been transferred, repeat 5.1 to transfer 20 µL of NC lysate into a Reagent tube.

5.6 Transfer 20 µL of NC lysate into a RC tube. Dispense at an angle to avoid disturbing the pellets. Mix by gently

pipetting up and down 5 times.

6. Load capped tubes into a clean and decontaminated 3M Molecular Detection Speed Loader Tray. Close and latch the

3M Molecular Detection Speed Loader Tray lid.

20 µL

7. Review and conrm the congured run in the 3M Molecular Detection Software.

11

(English)

EN

8. Click the Start button in the software and select instrument for use. The selected instrument’s lid automatically opens.

9. Place the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray into the 3M Molecular Detection Instrument and close the lid to

start the assay. Results are provided within 75 minutes, although positives may be detected sooner.

10. After the assay is complete, remove the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray from the 3M Molecular Detection

Instrument and dispose of the tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour and away

from the assay preparation area.

Notice: To minimize the risk of false positives due to cross-contamination, never open reagent tubes containing amplied

DNA. This includes Reagent Control, Reagent, and Matrix Control tubes. Always dispose of sealed reagent tubes by

soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour and away from the assay preparation area.

Results and Interpretation

An algorithm interprets the light output curve resulting from the detection of the nucleic acid amplication. Results are

analyzed automatically by the software and are color-coded based on the result. A Positive or Negative result is determined

by analysis of a number of unique curve parameters. Presumptive positive results are reported in real-time while Negative

and Inspect results will be displayed after the run is completed.

Presumptive positive samples should be conrmed as per the laboratory standard operating procedures or by following

the appropriate reference method conrmation

(1, 2, 3)

, beginning with transfer from the primary enrichment to secondary

enrichment broth (if applicable), followed by subsequent plating and conrmation of isolates using appropriate

biochemical and serological methods.

In the context of the NF VALIDATION, all samples identied as positive by the 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria

must be conrmed by one of the following tests:

Option 1: Using the ISO 11290-1

(3)

standard starting from Demi-Fraser enrichment

Option 2: Implementing a conrmation method consisting of the following: Transfer 0.1 mL of the Demi-Fraser broth.

Streak directly onto selective agar described in ISO 11290-1

(3)

.

Option 3: Using nucleic acid probes as described in EN ISO 7218

(5)

standard, performed on isolated colonies, from

selective agar (see Options 1 or 2).

Option 4: Using any other method certied NF VALIDATION, the principle of which must be dierent from 3M Molecular

Detection Assay 2 - Listeria. The complete protocol described for this second validated method must be used. All steps

prior to the start of conrmation must be common to both methods.

In the event of discordant results (presumptive positive with the alternative method, non-conrmed by one of the means

described above) the laboratory must follow the necessary steps to ensure the validity of the result obtained.

Note: Even a negative sample will not give a zero reading as the system and 3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria

amplication reagents have a “background” relative light unit (RLU) reading.

In the rare event of any unusual light output, the algorithm labels this as “Inspect.” 3M recommends the user to repeat

the assay for any Inspect samples. If the result continues to be Inspect, proceed to conrmation test using your preferred

method or as specied by local regulations.

If you have questions about specic applications or procedures, please visit our website at www.3M.com/foodsafety or

contact your local 3M representative or distributor.

12

(English)

EN

Appendix A. Protocol Interruption: Storage and re-testing of heat-treated lysates

1. To store a heat-treated lysate, re-cap the lysis tube with a clean cap (see “LYSIS”, 4.5)

2. Store at 4 to 8°C for up to 72 hours.

3. Prepare a stored sample for amplication by inverting 2-3 times to mix.

4. Decap the tubes.

5. Place the mixed lysate tubes on 3M Molecular Detection Heat Block Insert and heat at 100 ±1°C for 5 ±1 minutes.

6. Remove the rack of LS tubes from the heating block and allow to cool in the 3M Molecular Detection Chill Block Insert

at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes.

7. Continue the protocol at the ‘Amplication’ section detailed above.

References:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analysis Manual. Chapter 10: Detection and Enumeration of Listeria

monocytogenes in Foods. January 2016 Version.

2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 8.08. Isolation and Identication of

Listeria monocytogenes from Red Meat, Poultry and Egg Products, and Environmental Samples. Eective Date: May 1,

2013.

3. ISO 11290-1. Microbiology of Food and Animal Feeding Stus – Horizontal Method for the Detection and Enumeration

of Listeria monocytogenes. Amendment 1, 2004-10-15.

4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stus – General rules for microbiological examination.

6. 3M. Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular

Detection System.

7. ISO 18593. Microbiology of food and animal feeding stus – Horizontal methods for sampling techniques from surfaces

using contact plates and swabs.

8. ISO 16140-2 Microbiology of the food chain – Method validation – Part 2: Protocol for the validation of alternative

(proprietary) methods against a reference method.

9. ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stus – Preparation of test samples, initial suspension and decimal

dilutions for microbiological examination.

Explanation of Symbols

www.3M.com/foodsafety/symbols

3M Health Care

2510 Conway Ave

St. Paul, MN 55144 USA

www.3M.com/foodsafety

3M is a trademark of 3M. Used under license in Canada.

34-8719-1665-5

3

3M Food Safety

3M United States

3M Center

Bldg. 275-5W-05

St. Paul, MN 55144-1000

USA

1-800-328-6553

3M Canada

Post Oce Box 5757

London, Ontario N6A 4T1

Canada

1-800-563-2921

3M Latin America

3M Center

Bldg. 275-5W-05

St. Paul, MN 55144-1000

USA

1-954-340-8263

3M Europe and MEA

3M Deutschland GmbH

Carl-Shurz - Strasse 1

D41453 Neuss/Germany

+49-2131-14-3000

3M United Kingdom PLC

Morley Street,

Loughborough

Leicestershire

LE11 1EP

United Kingdom

+(44) 1509 611 611

3M Österreich GmbH

Euro Plaza

Gebaude J, A-1120 Wien

Kranichberggasse 4

Austria

+(43) 1 86 686-0

3M Asia Pacic

No 1, Yishun Avenue 7

Singapore, 768923

65-64508869

3M Japan

3M Health Care Limited

6-7-29, Kita-Shinagawa

Shinagawa-ku, Tokyo

141-8684 Japan

81-570-011-321

3M Australia

Bldg A, 1 Rivett Road

North Ryde, NSW 2113

Australia

61 1300 363 878

(Français)

FR

1

3

Date de publication: 2016-08

Instructions relatives au produit

Kit de détection moléculaire Listeria sp version2

Description du produit et utilisation prévue

Le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M™ version2 s'utilise avec le Système de détection moléculaire 3M™ an de

détecter de manière rapide et spécique la présence d’espèces de Listeria dans les aliments enrichis et les échantillons

environnementaux.

Les Kits de détection moléculaire 3M utilisent la technique LAMP (loop-mediated isothermal amplication– amplication

isotherme médiée par des boucles) an d’amplier rapidement les séquences d’acide nucléique de façon extrêmement

spécique et sensible, associée à la bioluminescence pour détecter l’amplication. Les résultats présumés positifs sont

rapportés en temps réel tandis que les résultats négatifs sont achés à la n de l’essai. Les résultats présumés positifs

doivent être conrmés par vos méthodes usuelles ou comme spécié par les réglementations locales

(1, 2, 3)

.

Le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 est destiné à être utilisé au sein de laboratoires, par des

professionnels formés aux techniques s’y rapportant. 3M n’a pas étudié l’utilisation de ce produit dans des secteurs autres

que l’alimentaire et les boissons. Par exemple, 3M n’a pas documenté ce produit dans le cadre de tests sur des échantillons

d’eau ou de produits pharmaceutiques, cosmétiques, cliniques ou vétérinaires. Le Kit de détection moléculaire Listeria sp

3M version2 n’a pas été évalué en utilisant tous les protocoles de test ou toutes les souches de bactéries possibles.

Comme pour toutes les méthodes de test, la source du milieu d’enrichissement peut inuencer les résultats. Des

facteurs tels que les méthodes d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des échantillons, la manipulation

et les techniques de laboratoire peuvent également inuencer les résultats. 3M recommande l’évaluation de la méthode

comprenant le milieu d’enrichissement, dans l’environnement de l’utilisateur en utilisant un nombre susant d’échantillons

avec des aliments spéciques et/ou des échantillons environnementaux et des épreuves microbiennes an de garantir que

la méthode répond aux critères de l’utilisateur.

3M a évalué le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 avec un Bouillon demi-Fraser contenant du citrate de

fer ammoniacal. Une formulation type de ces milieux est indiquée ci-dessous.

Formule type de la Base Bouillon demi-Fraser (g/l) Formule type de la Base Bouillon Fraser (g/l)

Chlorure de sodium 20g Chlorure de sodium 20g

Phosphate de sodium dibasique anhydre * 9,6g Phosphate de sodium dibasique anhydre 9,6g

Extrait de bœuf 5,0g Extrait de bœuf 5,0g

Digestat pancréatique de caséine 5,0g Digestat pancréatique de caséine 5,0g

Digestat peptique de tissus animaux 5,0g Digestat peptique de tissus animaux 5,0g

Extrait de levure 5,0g Extrait de levure 5,0g

Chlorure de lithium 3,0g Chlorure de lithium 3,0g

Phosphate monobasique de potassium 1,35g Phosphate monobasique de potassium 1,35g

Esculine 1,0g Esculine 1,0g

Acriavine HCl 0,0125g Acriavine HCl 0,025g

Acide nalidixique 0,01g Acide nalidixique 0,02g

* Élément de substitution: phosphate de sodium dibasique dihydraté 12,0g

Supplément pour Bouillon Fraser

(Ingrédients par acon de 10ml. Un acon est ajouté à un litre de milieu de base.)

Citrate de fer ammoniacal 0,5g/ 10ml

pH nal 7,2±0,2 à 25°C

L’Instrument de détection moléculaire 3M™ est conçu pour être utilisé avec des échantillons ayant été soumis à un

traitement thermique pendant l’étape de lyse, procédé qui détruit les organismes présents dans l’échantillon. Les

échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent être considérés

comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’Instrument de détection moléculaire 3M.

(Français)

FR

2

La conception et la fabrication 3M Sécurité Alimentaire sont certiées ISO (International Organization for Standardization)

9001.

Le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 contient 96tests, décrits dans le tableau1.

Tableau1. Contenu du kit

Article Identication Quantité Contenu Commentaires

Tubes de

solution de lyse (LS)

Solution rose en tubes

transparents

96 (12barrettes de

8tubes)

580l de LS par tube

Placés sur portoir et

prêts à l’emploi

Tubes de réactif de

Listeria

Tubes bleus

96 (12barrettes de

8tubes)

Mélange spécique

lyophilisé pour

l’amplication et la

détection

Prêts à l’emploi

Bouchons

supplémentaires

Bouchons bleus

96 (12barrettes de

8bouchons)

Prêts à l’emploi

Contrôle de réactif

(RC)

Tubes «Flip-Top»

transparents

16 (2poches de

8tubes individuels)

ADN témoin

lyophilisé, mélange

pour l’amplication et

la détection

Prêts à l’emploi

Guide de démarrage

rapide

1

Le témoin négatif, non fourni dans le kit, est un milieu d’enrichissement stérile, par exemple le Bouillon demi-Fraser. Ne pas

utiliser d’eau comme témoin négatif.

Sécurité

L’utilisateur doit lire, comprendre et suivre toutes les informations de sécurité mentionnées dans les instructions relatives

au Système de détection moléculaire 3M et au Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2. Conserver ces

consignes de sécurité pour référence ultérieure.

AVERTISSEMENT: Indique une situation dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner un décès, des

blessures graves et/ou des dommages matériels.

MISE EN GARDE: Indique une situation dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner des blessures

mineures à modérées et/ou des dommages matériels.

AVIS: Indique une situation potentiellement dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner des

dommages matériels.

W AVERTISSEMENT

Ne pas utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 pour diagnostiquer des pathologies chez les

humains ou les animaux.

La méthode utilisant un Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 peut générer des taux de Listeria

monocytogenes susamment élevés pour provoquer la mise au monde d’un enfant mort-né ou le décès de femmes

enceintes ou de personnes immunocompromises, si ces dernières y sont exposées.

L’utilisateur doit former son personnel de manière appropriée aux techniques d’analyse actuelles: par exemple, les

bonnes pratiques de laboratoire et les normes ISO/IEC17025

(4)

, or ISO7218

(5)

.

An de réduire les risques associés aux faux négatifs, qui peuvent entraîner la diusion de produits contaminés:

• Suivre le protocole et réaliser les analyses exactement comme indiqué dans les instructions relatives au produit.

• Conserver le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 conformément aux indications sur l’emballage et aux

instructions relatives au produit.

• Toujours utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 avant la date de péremption.

• Utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 avec des aliments et des échantillons environnementaux

ayant été validés en interne ou par une tierce partie.

• N’utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 qu’avec des surfaces, des désinfectants, des

protocoles et des souches bactériennes ayant été validés en interne ou par une tierce partie.

• En cas d’échantillon environnemental contenant un tampon neutralisant avec complexe d’aryle sulfonate, eectuer une

dilution de 1:2 avant de procéder au test (1volume d’échantillon dans 1volume de bouillon d’enrichissement stérile). Une

autre possibilité consiste à transférer 10l d’enrichissement de tampon neutralisant dans les tubes de LS. Les produits

de manipulation d’échantillons 3M™ contenant un tampon neutralisant avec complexe d’aryle sulfonate sont les

suivants: BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, XSLSSL10NB, HS10NB et HS119510NB.

(Français)

FR

3

An de réduire les risques associés à l’exposition aux produits chimiques et aux dangers biologiques:

• Il est fortement conseillé d’informer le personnel féminin du laboratoire quant au risque pour le fœtus en

développement en cas d’infection de la mère à la suite d’une exposition à la Listeria monocytogenes.

• Eectuer les analyses bactériologiques dans un laboratoire doté du matériel nécessaire et sous la supervision de

professionnels qualiés.

• Toujours respecter les consignes de sécurité standard du laboratoire, et porter des tenues et lunettes de protection

adaptées lorsque les réactifs et les échantillons contaminés sont manipulés.

• Éviter tout contact avec le contenu du milieu d’enrichissement et les tubes de réactif après l’amplication.

• Éliminer les échantillons enrichis conformément aux réglementations locales/régionales/nationales et normes du

secteur actuelles.

• Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent

être considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’Instrument de détection

moléculaire 3M.

An de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’essai:

• Toujours porter des gants (an de protéger l’utilisateur et de prévenir l’introduction de nucléases).

MISE EN GARDE

• Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chaue.

• Ne pas dépasser le temps de chaue recommandé.

• Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérier la température du Support de bloc chauant pour système de

détection moléculaire 3M™ (p.ex., thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple numérique, et

non thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du Support de bloc chauant

pour système de détection moléculaire 3M.

AVIS

An de réduire les risques associés à la contamination croisée, y compris des résultats faux positifs:

• Utiliser de préférence des pipettes de qualité biologie moléculaire, stériles et munies d’embouts à ltre.

• Utiliser une nouvelle pipette pour chaque transfert d’échantillon.

• Utiliser les bonnes pratiques de laboratoire lors du transfert de l’échantillon du milieu d’enrichissement au tube de lyse.

Pour éviter toute contamination des pipettes, l’utilisateur peut choisir d’ajouter une étape de transfert intermédiaire. Par

exemple, l’utilisateur peut transférer chaque échantillon enrichi dans un tube stérile.

• Utiliser un poste de travail de biologie moléculaire disposant si possible d’une lampe germicide.

• Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/fermeture,

etc.) avec une solution de 1-5% d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution d’élimination de l’ADN.

An de réduire les risques associés à un résultat faux positif:

• Ne jamais ouvrir les tubes après amplication.

• Toujours éliminer les tubes contaminés en les faisant tremper dans une solution d’eau de Javel à 1-5% (v:v dans l’eau)

pendant 1heure. Eectuer cette procédure à distance de la zone de préparation de l’analyse.

Consulter la Fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la réglementation

locale relative à l’élimination.

Si vous avez des questions concernant des applications ou procédures spéciques, veuillez consulter notre site Internet à

l’adresse www.3M.com/foodsafety ou contacter votre représentant ou distributeur 3M local.

Limitation de garantie/limites de recours

SAUF MENTION EXPRESSE DANS LA SECTION DE GARANTIE LIMITÉE D’UN EMBALLAGE DE PRODUIT INDIVIDUEL,

3M RENONCE À TOUTE GARANTIE EXPLICITE ET IMPLICITE, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER, TOUTE GARANTIE

DE COMMERCIALISATION OU D’ADAPTATION POUR UN USAGE SPÉCIFIQUE. En cas de défaut de tout produit

de Sécurité Alimentaire 3M, 3M ou son distributeur agréé s’engage, à son entière discrétion, au remplacement ou au

remboursement du prix d’achat du produit. Il s’agit de vos recours exclusifs. Tout défaut supposé du produit devra être

notié à 3M dans un délai de soixante jours et le produit renvoyé au fournisseur. Veuillez appeler le Service clientèle

(1-800-328-1671 aux États-Unis) ou votre représentant 3M en produits de microbiologie pour obtenir une autorisation de

renvoi.

Limitation de responsabilité de 3M

3M NE SERA PAS TENUE RESPONSABLE DES PERTES OU DES DOMMAGES ÉVENTUELS, QU’ILS SOIENT DIRECTS,

INDIRECTS, SPÉCIFIQUES, ACCIDENTELS OU CONSÉCUTIFS, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER, LES PERTES DE

PROFITS. En aucun cas et en aucune manière, la responsabilité de 3Ms ne sera engagée au-delà du prix d’achat du produit

prétendu défectueux.

Responsabilité de l’utilisateur

Il incombe aux clients et aux utilisateurs de connaître les instructions et les informations. Veuillez visiter notre site

www.3M.com/foodsafety pour consulter les instructions les plus récentes ou contacter votre représentant ou distributeur

3M local.

(Français)

FR

4

Lors du choix d’une méthode de test, il est important d’admettre que des facteurs externes comme les méthodes

d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des échantillons, la manipulation et les techniques de laboratoires

peuvent inuencer les résultats.

Il incombe à l’utilisateur de sélectionner une méthode d’analyse pour évaluer un nombre susant d’échantillons avec les

matrices et les épreuves microbiennes appropriées an de garantir que la méthode d’analyse réponde aux critères de

l’utilisateur.

Il incombe également à l’utilisateur de déterminer si une méthode d’analyse et ses résultats répondent aux exigences de

ses clients ou fournisseurs.

Comme avec n’importe quelle méthode de test, les résultats obtenus avec ce produit ne constituent pas une garantie de la

qualité des matrices ou des processus testés.

Dans le but d’aider les clients à évaluer la méthode pour diérentes matrices alimentaires, 3M a élaboré le kit de Contrôle

de matrice pour système de détection moléculaire 3M™. Lorsque cela est nécessaire, utiliser le Contrôle de matrice (MC)

pour déterminer si la matrice peut avoir un impact sur les résultats du Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2.

Tester plusieurs échantillons représentatifs de la matrice, c.-à-d. des échantillons d’origines diérentes, au cours de

toute période de validation lors de l’adoption de la méthode 3M ou dans le cadre d’analyses de nouvelles matrices ou de

matrices inconnues ou ayant été soumises à des modications de matières premières ou de processus.

Une matrice peut être dénie comme un type de produit pourvu de propriétés intrinsèques comme sa composition et

son processus. Les diérences entre les matrices peuvent être aussi simples que les eets causés par leurs diérences de

processus ou de présentation, par exemple, cru/pasteurisé, frais/sec, etc.

Stockage et mise au rebut

Conserver le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 à une température comprise entre 2 et 8°C. Ne pas

congeler. Conserver le kit à l’abri de la lumière au cours du stockage. Une fois le kit ouvert, vérier que le sachet en

aluminium est intact. Si ce sachet est endommagé, ne pas utiliser le kit. Après ouverture, les tubes de réactif non utilisés

doivent toujours être conservés dans le sachet refermable, en laissant l’agent déshydratant à l’intérieur an de maintenir

la stabilité des réactifs lyophilisés. Conserver les poches refermées à une température comprise entre 2et8°C. Ne pas

conserver plus de 60jours.

Ne pas utiliser le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 après la date de péremption. La date de péremption

et le numéro de lot sont inscrits sur l’étiquette extérieure de la boîte. Après utilisation, il est possible que les tubes de

milieu d’enrichissement et du Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 contiennent des éléments pathogènes.

Lorsque l’analyse est terminée, suivre les normes actuelles du secteur pour l’élimination des déchets contaminés. Consulter

la Fiche de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la réglementation locale

relative à l’élimination.

Instructions d’utilisation

Suivre attentivement toutes les instructions. Le non-respect des instructions peut entraîner des résultats inexacts.

L’utilisateur doit suivre la formation de qualication d’opérateur du système de détection moléculaire 3M, mentionnée dans

le document "Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular

Detection System"

(6)

.

Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/fermeture, etc.)

avec une solution de 1-5% d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) ou avec une solution d’élimination de l’ADN.

Voir la section "Instructions spéciques pour des méthodes validées" pour les prérequis spéciques:

Tableau3 pour les protocoles d’enrichissement selon l’AOAC

®

Ocial Method

SM

2016.07 et le Performance Tested

SM

Certicate #111501

Tableau4 pour les protocoles d’enrichissement selon le certicat de validation NF 3M 01/14-05/16

Enrichissement des échantillons

Les tableaux2, 3 ou 4 fournissent des indications pour l’enrichissement des échantillons alimentaires et environnementaux.

Il incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage ou des proportions de dilution diérents pour garantir

que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.

Aliments

1. Laisser le milieu d’enrichissement avec Bouillon demi-Fraser (avec citrate de fer ammoniacal) s’équilibrer à la

température ambiante du laboratoire.

2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon, conformément au tableau2, 3 ou 4. Pour

tous les échantillons carnés et à forte teneur en particules, il est recommandé d’utiliser des sacs avec ltre.

3. Homogénéiser soigneusement par mélange, par digestion ou à la main pendant 2±0,2minute. Incuber à 37±1°C

conformément au tableau 2,3 ou 4.

4. Pour les produits laitiers crus, transférer 0,1ml du premier enrichissement dans 10ml de bouillon Fraser. Incuber à

37±1°C pendant 20 à 24heures.

(Français)

FR

5

Échantillons environnementaux

Pour prélever les échantillons, il est possible d’utiliser une éponge hydratée au moyen d’une solution neutralisante an

d’éviter les eets des produits désinfectants. 3M recommande d’utiliser une éponge en cellulose sans biocide. Pour la

solution neutralisante, vous pouvez utiliser par exemple le bouillon neutralisant (D/E) ou le bouillon Letheen Dey Engley. Il

est recommandé de désinfecter la zone après l’échantillonnage.

AVERTISSEMENT: en cas de recours à une éponge humidiée à l’aide d’un tampon neutralisant (NB) contenant un

complexe d’aryle sulfonate, diluer l’échantillon environnemental enrichi dans une dilution de 1:2 (1volume d’échantillon

pour 1volume de bouillon d’enrichissement stérile) avant l’analyse, an de réduire les risques associés aux résultats faux

négatifs, qui entraînent la libération de produits contaminés.

La zone d’échantillonnage utilisée pour vérier la présence ou non du pathogène doit faire au moins 100cm

2

(10×10 cm).

Dans le cas de l’échantillonnage au moyen d’une éponge, couvrir toute la surface dans les deux sens (de gauche à droite

puis de haut en bas) ou bien prélever des échantillons environnementaux selon le protocole d’échantillonnage actuel ou

conformément aux normes du Bacteriological Analytical Manual (Manuel analytique bactériologique– BAM) de la FDA

(1)

,

au Microbiology Laboratory Guideline (Guide du laboratoire de microbiologie– MLG) du Food Safety and Inspection

Service (Service d’inspection chargé de la sécurité des produits alimentaires– FSIS) du US Department of Agriculture

(ministère de l’Agriculture des États-Unis– USDA)

(2)

ou ISO 18593

(7)

.

1. Laisser le milieu d’enrichissement avec Bouillon demi-Fraser (avec citrate de fer ammoniacal) s’équilibrer à la

température ambiante du laboratoire.

2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon, conformément au tableau2, 3 ou 4.

3. Homogénéiser soigneusement par mélange, par digestion ou à la main pendant 2±0,2minute. Incuber à 37±1°C

conformément au tableau2, 3 ou 4.

(Français)

FR

6

Tableau2: Protocoles d’enrichissement généraux au moyen d’un enrichissement avec Bouillon demi-Fraser à 37±1°C et

avec Bouillon Fraser le cas échéant.

Matrice de

l’échantillon

Taille de

l’échantillon

Volume du

bouillon

d’enrichisse

-ment (ml)

Tem-

pérature

d’enrichisse

-ment

(±1°C)

Durée

d’enrichisse

-ment (h)

Viandes,

volaille,

fruits de

mer et pois-

son soumis

à traitement

thermique,

cuits et

salaisonnés

Produits

laitiers

soumis à

traitement

thermique/

pasteurisés

Fruits et

légumes

Produits

alimentaires

à plusieurs

composants

25g 225 37 24-30

Échantillons

environne

mentaux

1éponge 100 ou 225 37 24-30

1écouvillon 10 37 24-30

Viande

crue,

volaille,

fruits de

mer,

poisson

25g 475 37 28-32

Matrice de

l’échantillon

Premier enrichissement (Bouillon demi-Fraser)

(a)

Second enrichissement

(Bouillon Fraser)

(a)

Volume

d’échantillon

d’analyse

(b)

Taille de

l’échantillon

Volume du

bouillon

d’enrichisse

-ment (ml)

Tem-

pérature

d’enrichisse

-ment

(±1°C)

Durée

d’enrichisse

-ment (h)

Taille de

l’échantillon

Tem-

pérature

d’enrichisse

-ment

(±1°C)

Durée

d’enrichisse

-ment (h)

Produits

laitiers crus

25g 225 37 20-24

Transférer

0,1ml dans

10ml de

Bouillon

Fraser

37 20-24 10l

(a) Bouillon demi-Fraser et Bouillon Fraser doivent toujours être complétés par un supplément de Bouillon Fraser (citrate de

fer ammoniacal) lors du premier ou du second enrichissement.

(b) Volume d’échantillon transféré dans les tubes de solution de lyse. Se référer à l’étape4.6 de la section Lyse.

(Français)

FR

7

Instructions spéciques pour des méthodes validées

AOAC® Ocial Method

SM

2016.07

AOAC® Performance Tested Method

SM

#111501

Lors d’études AOAC OMA et PTM, le Kit de détection moléculaire Listeria sp 3M version2 s’est révélé être une méthode

ecace pour la détection d’espèces de Listeria. Les matrices testées dans l’étude sont présentes dans le tableau3.

Tableau3. Protocoles d’enrichissement au moyen d’un enrichissement avec Bouillon demi-Fraser

(a)

à 37±1°C selon

l’AOAC Ocial Method

SM

2016.07 et le Performance Tested

SM

Certicate #111501

Matrice de l’échantillon

Taille de

l’échantillon

Volume du bouillon d’enrichissement

(ml)

Durée

d’enrichissement (h)

Hot dogs au bœuf, queso fresco

(fromage frais), glace à la vanille,

fromage blanc 4% de matière grasse

laitière, lait entier chocolaté 3%,

laitue romaine, sachet d’épinards crus,

saumon fumé à froid

25g 225 24-30

Poulet cru 25g 475 28-32

Dinde de charcuterie 125g 1125 24-30

Cantaloup

(b)

Melon entier

Assez de volume pour permettre au

melon de otter

26-30

Échantillons

environnementaux:

Acier inoxydable 1éponge 225 24-30

Béton scellé 1éponge 100 24-30

Plastique

(c)

1écouvillon 10 24-30

Tous les échantillons pour la validation AOAC ont été homogénéisés par digestion sauf indication contraire.

(a) Bouillon demi-Fraser et Bouillon Fraser doivent toujours être complétés par un supplément de Bouillon Fraser (citrate de

fer ammoniacal) lors du premier ou du second enrichissement.

(b) Échantillon homogénéisé à la main.

(c) Échantillon homogénéisé par tourbillons.

Validation NF par certication AFNOR

3M 01/14-05/16

Méthodes analytiques alternatives pour l’agribusiness

http://nf-validation.afnor.org/en

Pour plus d’informations sur la n de validité, veuillez vous référer au certicat de validation NF disponible à l’adresse

mentionnée ci-dessus.

Méthode certiée de la validation NF en conformité avec ISO16140-2

(8)

en comparaison à ISO11290-1

(3)

Champ d’application de la validation: Tous les aliments à destination des humains et échantillons environnementaux (sauf

échantillons de production primaire)

Préparation de l’échantillon: Les échantillons doivent être préparés selon les normes EN ISO11290-1

(3)

and EN ISO6887

(9)

Version du logiciel: Voir le certicat

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3M Molecular Detection Assay 2 - Listeria MDA2LIS96, 96 tests, 1 ea 取扱説明書

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