Allergen Protein ELISA Kit

3M Allergen Protein ELISA Kit 取扱説明書

  • こんにちは!3M カシュープロテインELISAキット E96CHW の製品説明書の内容を理解しています。このキットを用いたカシューナッツタンパク質の検出方法、試薬の調製方法、ELISA手順など、ご質問にお答えしますので、お気軽にご相談ください。
  • 試薬の調製方法は?
    サンプル調製手順は?
    ELISA手順は?
(日語)
JA
1
発行日 2017-11
製品情報
ELISA
質の定量分析用酵素結合免疫吸着検査ELISA
製品の概要用途
3M™ カプロELISAは、定置洗浄水CIP)の最終洗浄水、環境検体、食材、加工食品に存在
ナッツタンキットです。
3M カプロELISAはサELISAを利用 検体中に存在ーナ質は、
ル表面に吸着た抗ーナ抗体と反応 洗浄に未結合
質の除去後、西洋ビペーゼ(HRP結合た抗カーナ抗体を添加 の酵素標識抗体は、
前に結合ーナ質と複合体を形成 2度目の洗浄後、免疫吸着剤に結合た酵素は発色基質で
3,3’,5,5’-ルベジジTMB)添加検出 酵素反応に発色は、検査た検体中ーナ
質の濃度にて直接変化たが450 nmでの吸光度は、検体中のーナ質の濃度を
指標と 検体中のーナ質量は、既知の濃度標準か描出た標準曲線外挿で検体希釈を
考慮調整で
3M カプロELISAは、検査技術の訓練を受けた技術者が検査室環境使用想定 3Mは、
食品たは飲料以外の産業におけ本製品の使用には検証ん。 えば3Mは、本製品を医薬品、化粧品、
臨床たは動物診断検体の検査使用ついて検証ん。 3M カELISAキは、
食材、食品製造工程、検査プロルに評価されたわけはあん。
3M カプロELISAは、表1に記載の96検体用と
表1. ット の 内
品目 特徴 調製
は「
調 」セ
参 照てく
保管 安定性
3M™ カプロ
ELISA
除去可能な抗体コー
た961枚入
イルバッグ1
調整済み 乾燥剤を入れ
イルバッ
して2
~8°C保管
てく い 。
未使用の乾燥
イルバッ
再度密封
の使用期
安定性を維持
には、2~8°C保管
てくだ さ
3M™ カーHRP
ゲー(10倍)
10倍西洋
HRP標識抗体10倍1.5
mL入ル1本。
使用直前に1/10に希釈
1倍の希釈標準溶
調 製てく
にて2
~8℃保管
10倍ゲー
の使用期限
安定性を維持
3M™ カプロ
標準濃縮液
既知濃度のーナ
質濃縮液入
1本。
標準的な調製手順
は、「ELISAの手順
ョン 参 照てく
さい
2~8°C。 冷凍
でくだ
さい
3M カプロ
標準濃縮液は、
使用期限安定性を
ます。
3M™ 希釈液(5倍 5倍希釈液50 mL入
1本。
使用直前に1/5に希釈
1倍の希釈標準溶
調 製てく
2~8°C 5倍の3M 希釈溶液は
の使用期限
安定性を維持
3
(日語)
JA
2
3M™ 洗浄液(20倍 20倍洗浄液50 mL入のボ
1本。
1/20に希釈1倍の
希釈標準溶液を調製
てく い 。
1倍希釈標準
溶液20倍
洗浄液濃縮液
いずれも2
~8°C保管
てく い 。
20倍の3M 洗浄液は、
使用期限まで安
定性を維持
1倍洗浄液は、調製後1
週間以上安定性を維持
3M™ 抽出緩衝液E26
(4倍)
4倍抽出緩衝液120 mL入
ボト 1 本
1/4に希釈1倍の
希釈標準溶液を調製
ださい。 使用前
希釈標準溶液を50
~60°Cに加熱
さい
1倍希釈標準
溶液4倍の
3M 抽出緩衝
いずも2
~8°C保管
てく い 。
1倍抽出緩衝液4倍の
3M 抽出緩衝液は、
使用期限まで安定
す。
3M™ 発色基質溶液 3,3’,5,5’-ルベジジ
TMB12 mL入のボル1本。
調整済み にて2
~8℃保管
てく い 。
直射日光を避け
3M 発色基質溶
液は、の使用期
安定性を維持
す。
3M™ 反応停止液 0.3M硫酸12 mL入のボ
1本。
調整済み 2~8°C 3M 反応停止液は
使用期限まで安定
に同梱れない器具類
ペットおペットチ10100 L採取用
試験管
洗浄機/ア
蒸留水たは脱
イタートリ
試薬お緩衝液調製用の各種実験機器
タイマ
撹拌機
振盪水槽たは振盪培養器
シェ
安全性
3M カプロELISA使用にな前に本書に記載の安全情報お読みにな理解遵守
ださい。の情報は大切に保管ださい。
警 告: 適切な危険予防措置が行わいな場合、死亡または重篤な傷害や物的損害が発生可能性があ
記: 適切な危険予防措置が行わいな場合、危険な状況に物的損害が発生場合があ
W 警告
化学物質の曝露に関連危険を回避ために
現行の行政規制お産業基準にて廃棄ださい。
検査実施担当者に現行の適切な検査技術を身につけ指導(例GLP
1
たはISO/IEC 17025
2
)。
試薬を際は、適切な保護衣、保護ネの装着など標準的な検査室の安全手順に常に従ださ
3M 反応停止液が皮膚に接触い。の他の安全に関情報は、安全参照ださ
い。
汚染物質の放出になが偽陰性の結果に危険を回避ために
3M カプロELISAは、外装表示おび製品情報に記載に保管ださい。
3M カプロELISAは、社内まは第三者に検証をた食品検体環境検体に使用ださ
い。
(日語)
JA
3
ルに従い製品情報に記載に検査ださい。
3Mは、食品まは飲料以外の産業におけ3M カプロELISAキの使用には検証ん。
えば3Mは、本製品を医薬品、化粧品、臨床たは動物診断検体の検査使用ついて検証ん。
汚染物質の放出になが不正確な測定結果に危険を回避ため
3M カプロELISAは使用期限に必使用ださい。
希釈標準液を調製際は、3M カプロELISA必ず20~25°C使用ださ
3M カプロ標準濃縮液を冷凍ないださい。
発色基質溶液が青変色場合は、使用ないださい。 3M 発色基質溶液の交差汚染回避ため、GLP
1
注記
不正確な測定結果に伴危険を回避ために
抽出後検体の安定性は評価ん。 ELISA手順は、検体の抽出直後に実施必要があ
検体の交差汚染を回避ため、3M カプロ標準濃縮液はGLP
1
って ってくだ
の他の情報には製品安全参照ださい。
製品性能に資料の詳細を希望の場合は、当社のWebサ(www.3M.com/foodsafety覧いただ3M販売担
者またはお販売店までお問い合わださい。
客様の使用責任
お客様には使用前に添付文書製品情報を熟読情報に精通責任があ 詳細には、当社
www.3M.com/foodsafety覧いただお近の3M販売担当者たは販売店にお問い合わせださ
食品分析使用検査方法同様に試験スが結果に影響を可能性があ 検査方法を選択
際には、方法、検査ル、ルの準備、扱いび検査手技なの外的要因が結果に影響
認識が重要 食品サのものが結果に影響
十分な数ルを評価の検査方法がお客様の基準満た納得で検査方法たは製品を選択
は、お客様の責任と
た、の検査方法び結果が顧客あは供給業者の要求をお客様の判断
の検査方法を使用た場合3M食品衛生管理製品を使用た結果検査で使用た食材たは工程中
を保証するものでありません
保証の制限/限定的救済策
個々の製品の限定保証条項に明示さ場合を3Mは明示たは黙示を問わず商品性たは特定の目的
への適合性保証を含むれに限定れな種類の保証も負いかね 3M食品衛生部門の製品に欠陥
場合、3Mまたは取扱販売店交換あは返品処理を 対応は上記のただ 製品の欠陥
が疑わ場合は、判明時点か60日以内にかに3Mに通知製品を3Mに返送必要が 返品可否に
はカお電話に連絡いただお近の3M食品衛生部門お問い合わせい。
3Mの保証責任範囲
3Mは、直接的間接的、特殊、偶発的または必然的を問わず利益損失を含むれに限定れな損失に対の責
任を放棄かな場合におい法的理論に3Mの保証責任範囲は、欠陥と認めれた製品の購入
を超ことありません
保管廃棄
3M カプロELISAの内容物は、2~8°C保管ださい。 冷凍ださい。 希釈た希釈標準液は
表1に記載の保存ださい。
3M カプロELISAの内容物が使用期限を過ぎた場合は、使用ないださい。 使用期限お番号は
外箱ベルに記載
現行の行政規制お産業基準にて廃棄ださい。
使用方法
の指示に注意深ださわない場合正確結果が得れな
試薬の調製
使用前にの試薬を周囲温度(20~25°Cに戻ださい。 清潔な実験機器使用希釈標準液を希釈保管
(日語)
JA
4
a. 3M 抽出緩衝液
1倍抽出緩衝液を調製には、3M 抽出緩衝液4倍1を添加水または蒸留水3希釈 使用前に水槽
たは振盪培養器で抽出緩衝液(1倍め50~60°Cに加温い。 各検体に1倍抽出緩衝液4.5 mL
b. 3M 希釈溶液
1倍希釈溶液を調製には、3M 希釈液5倍1を水まは蒸留水4に添加 各検体に1倍希釈溶液
4.5 mLが必要
c. 3M 洗浄液
1倍洗浄液を調製には、3M 洗浄液20倍1を水まは蒸留水19に添加 各3M ELISAウルに
1倍洗浄液約2.5 mLが必要
3M 洗浄液20倍2~8°C保存液中に結晶が発生 洗浄液1倍の調製前3M 洗浄液
20倍水槽たは振盪培養器30~35°Cに加温ださい。
d. 3M ーHRPコン
1倍カーHRPゲー調製は、3M カーHRP10倍)1を添加1倍希釈溶液9で希
します 使用直前に調製ださ 各3M ELISAルに1倍カーHRP100 μLが必要
検体の準備
検体はめ50~60°Cに加温た1倍緩衝液抽出ださ
1.1 表2に記載の清潔な試験管たは使い質抽出用検体を調製
表2. 検体の準備
リッ 検体量 希釈液1/10
固形食品 0.5±0.02 g め加温た1倍抽出緩衝液4.5±0.09 mLを添加
液体食品 0.5±0.01 mL め加温た1倍抽出緩衝液4.5±0.09 mL添加
定置洗浄(CIP最終洗浄水 0.5±0.01 mL め加温た1倍抽出緩衝液4.5±0.09 mL添加
固体
液体
(日語)
JA
5
1.2 希釈た検体振盪水槽たは振盪培養器50~60°C、25±1分間培養 別法と検体を50~60°Cの水槽ま
たは培養器に入れ、5分1分間手で振盪
1.3 培養後、検体を5000~7000 rpm3000 x g20~30秒間遠心分離て微粒子試験管5分間
殿
1.4 中間層(水層100 μLを採取希釈溶液1倍900 μLに添加 撹拌機にかけ振盪て十分に混合
の検体は原検体の1/100希釈に相当
また
50~60°C
00:25:00
また
3000 g/00:00:30
00:05:00
ELISA手順
2.1 1検体たは1標準溶液に3M ELISAウルを1つルをルダーに 未使用の3M ELISA
ルをに戻再度密封2~8°Cの保管庫に
2.2 3M カプロ標準濃縮液を使用希釈溶液1倍)で希釈た標準溶液を4セ調製
標準番号 標準濃度
ng/mL
1倍希釈液に添加
標準溶液の容量
1倍希釈溶液の容量
4 243 3M カ
標準濃縮液10 μL
990 μL
3 81 標準溶液4 200 μL 400 μL
2 27 標準溶液3 200 μL 400 μL
1 9 標準溶液2 200 μL 400 μL
0 0 0 400 μL
2.3 各標準溶液100 μLをピペで3M ELISAルに滴下
標準溶液0(1倍希釈溶液
標準溶液19 ng/mLppb
標準溶液2(27 ng/mLppb
標準溶液3(81 ng/mLppb
標準溶液4243 ng/mLppb
2.4 1.4調製抽出検体100 μLを3M ELISAウルに滴下
2.5 3M ELISAルを400 rpmに設定ービルシで周囲温度20~25°C)30±2分間培養
このステカバをかち、いでさい
(日語)
JA
6
2.6 培養後、3M ELISAルの内容物を吸引
2.7 各3M ELISAルを1倍洗浄液完全に満た吸引 手作業洗浄場合は、て内容物
棄容器に注ぎ入れか振落と吸収紙上にルを付け洗浄液を落と 1回の洗浄の手順
3回繰合計4回洗浄
2.8 1倍カーHRPゲー100 μLをピペ各3M ELISAルに滴下 400 rpmに設定ービ
ーカルを周囲温度で10±2分間培養 プ中はバーかけ暗所で水平に保
2.9 プ2.62.7を洗浄液(1倍合計4回洗浄
2.10 3M 発色基質溶液(TMB100 μLを各3M ELISAウルに滴下
2.11 400 rpmに設定ルシーカルを周囲温度10分間培養 プ中はバー
かけ暗所で水平に保
2.12 培養後、各3M ELISAルに3M 反応停止液100 μLを添加30分以内に吸光度 (450 nm測定
00:30:00/周囲温度
00:10:00/周囲温度
(日語)
JA
7
00:10:00/周囲温度
結果の分析
3.1 各検体の平均値を検体の平均吸光度-標準溶液0の平均吸光度
3.2 4ーロジ曲線適合を描出で用いx軸上に濃度をng/mLppb
y軸上に対応各標準溶液の吸光度をプロ標準曲線(検量線 二次多項式二次方程式)
他の曲線適合も使用で適合の精度はれほど正確ではあん。
3.3 検量線か検体濃度を算出結果の単位はng/mL(ppb 次に検体の希釈係数て原検体の濃度得ま
えば検体の総希釈率が1/100で検量線の検体濃度が200 ng/mL(ppb場合は、最終検体濃度は
200 ng/mL x 100 = 20,000 ng/mL(ppbなわ20 μg/ mL(ppm
最低性能特性
a. 分析の検出限界LODは2.6 ng/mLppb
検出限界は、特定の確率水準真の検体と区別で検体中に存在の最低濃度
3
標準溶液0
48回測定場合の平均光学濃度値に3倍標準偏差(three standard deviations対応濃度を計算
とで
b. 定量限界(LOQ)は0.9 ppmで
定量限界は、特定の精度合理的に定量検体中に存在ルゲの最低濃度
3
再現性
併行精度(Intra-Assay Precision 平均%CV = <10 N = 12
室内再現精度(Inter-Assay Precision) 平均%CV = <10 N = 12
特異性おび交差反応性
はカ質を認識交差反応性には各種検体に試験が行わ(表3
表3. 3M カプロELISAの交差反応性。
食材検体 交差反応性(%
ンド <1%
ーモンルク <1%
BLG <1%
イン <1%
牛乳 <1%
ブラナッツ <1%
そば粉 <1%
シュッツ
(+)
ロリ <1%
ヒヨコ <1%
ナッツ <1%
(日語)
JA
8
ツミル <1%
ンフラ <1%
パルブアルブ <1%
ヘーゼ <1%
イマ <1%
ダミアナッ <1%
スタードード <1%
イド <1%
豆抽出物 <1%
ナッツ <1%
ナッツ <1%
松の実 <1%
ピスタチ <1%
チャ <1%
タテ <1%
ゴマ <1%
エビ <1%
ロコシ粉 <1%
大豆粉 <1%
豆乳 <1%
ワリ <1%
くる <1%
参考文献
1. 美国食品药品监督管理局。 美国《联邦规章典集(Code of Federal Regulations) 第 21 篇第 58 部分 非临床优良实验
室研究规范。
2. ISO/IEC 17025。 用于检验和定标实验室能力的一般要求
3. Abbott, M.、Hayward, S.Ross, W.、Godefroy, S.B.、Ulberth, F.、Van Hengel, A. J.、Roberts, J.、Akiyama, H.、Popping,
B.、Yeung, J.M.、Wehling, P.、Taylor, S.、Poms, R.E. 和 Delahaut, P(. 2010 年 附录 M 定量食物过敏原 ELISA 方法的
验证程序 社区指导和最佳做法。
J. AOAC Int.
93, 442-450
記号の説明
www.3M.com/foodsafety/symbols
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