3M Petrifilm™ Enterobacteriaceae Count Plates 取扱説明書

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（日本語）

JA

発行日： 2017-12

製品情報

腸内細菌科菌

群数測定用プレート

製品の概要および用途

3M™ ペトリフィルム™

腸内細菌科菌

群数測定用プレート（EBプレート）は、改良型バイオレットレッド胆汁ブドウ糖（VRBG）培地の

栄養成分と冷水可溶性ゲル、コロニーを数えやすくするテトラゾリウム指示薬が含まれている、できあがり培地です。 3M ペトリ

フィルム EBプレートは、食品や飲料、ボトル入り飲料水中の

腸内細菌科菌群

の測定用です。

腸内細菌科菌

群はオキシダーゼ陰性

のグラム陰性桿菌であり、ブドウ糖を発酵し、酸とガスの片方もしくは両方を産生します。

腸内細菌科菌

群は、3M ペトリフィルム

EBプレート上では、黄色の帯域を伴う赤色のコロニー、気泡を伴う赤色のコロニー、あるいは黄色の帯域と気泡の両方を伴う赤

色のコロニーとして確認されます。 3M ペトリフィルム EBプレートは滅菌されていませんが、汚染除去処理済みです。 3M食品衛

生管理製品は、設計と製造におけるISO（国際標準化機構）9001の認証を取得しています。 3M ペトリフィルム EBプレートは、あ

らゆる食材、食品製造工程、検査プロトコルや、

腸内細菌科菌

群その他の細菌のあらゆる菌株について評価されたわけではあり

ません。

安全性

3M ペトリフィルム EBプレートをご使用になる前に、本書に記載のすべての安全情報をお読みになり、よく理解し遵守してくださ

い。また、これらの情報は大切に保管してください。

警告：適切な危険予防措置が行われていない場合、死亡または重篤な傷害や、物的損害が発生する可能性があります。

W警告

バイオハザードや環境汚染への曝露に伴う危険を回避するために：

• バイオハザード廃棄物に関する現行の産業基準や地域の規制に従って廃棄してください。

汚染された製品の流出に伴う危険を回避するために：

• 本書に記載の製品保管方法に従ってください。

• 使用期限を過ぎた製品は使用しないでください。

細菌感染や作業場の汚染に伴う危険を回避するために：

• 3M ペトリフィルム EBプレートによる検査は、熟練した微生物管理者の管理の下で適切な設備のある検査室にて実施してく

ださい。

• 検査実施担当者に現行の適切な検査技術を身につけるように指導してください（例：GLP

1

、 ISO/EIC 17025

2

、ISO 7218

3

)。

結果の誤解釈に伴う危険を回避するために：

• 3Mは、食品およびボトル入り飲料水を含む飲料以外の分野における3M ペトリフィルム EBプレートの使用について検証して

おりません。たとえば、3Mは、3M ペトリフィルム EBプレートの医薬品や化粧品の分野における使用について検証しておりま

せん。 3Mは、地表水や水道水、または医薬品や化粧品の分野に使用される水への3M ペトリフィルム EBプレートの使用につ

いて検証しておりません。

• 水検体が現地の水質検査規則に従っていることを調べるために3M ペトリフィルム EBプレートを使用する場合には、お客様

独自の判断と責任の下で行ってください。3M ペトリフィルム EBプレートは、あらゆるボトル入り飲料水の検体、検査プロトコ

ル、あらゆる微生物の菌株について評価されたわけではありません。

• 3M ペトリフィルム EBプレートをヒトや動物の病態診断に使用しないでください。

• 3M ペトリフィルム EBプレートは、

腸内細菌科菌

群の菌株を特定することはできません。

その他の情報については製品安全データシートを参照してください。

具体的な用途や手順についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト（www.3M.com/foodsafety）をご覧いただくか、3M販

売担当者または取り扱い販売店までお問い合わせください。

お客様の使用責任

お客様には、使用前に添付文書および製品情報を熟読し、情報に精通する責任があります。詳細につきましては、当社ウェブサイト

www.3M.com/foodsafetyをご覧いただくか、お近くの3M販売担当者または販売店にお問い合わせください。

検査方法を選択する際には、サンプリング方法、検査プロトコル、サンプルの準備、取り扱い、および検査手技などの外的要因が

結果に影響することを認識することが重要です。

お客様の基準を満たすように、適切な食材および菌株を用いた十分な数のサンプルを評価するための検査方法または製品を選

択することは、お客様の責任となります。

2

（日本語）

JA

また、その検査方法および結果が顧客あるいは供給業者の要求を満たしているかについても、お客様の判断となります。

どの検査方法を使用した場合でも、3M食品衛生管理製品を使用して得られた結果により、検査で使用した食材または工程中の

品質を保証するものではありません。

保証の制限／限定的救済策：

個々の製品パッケージの限定保証条項に明示されている場合を除き、3Mは明示または黙示を問わず、商品性または特定の目的

への適合性に関する保証を含むがこれに限定されない、あらゆる種類の保証も負いかねます。 3M食品衛生部門の製品に欠陥が

あった場合、3Mまたは取扱販売店で交換あるいは返品処理をいたします。対応は上記のみとさせていただきます。製品の欠陥

が疑われる場合は、判明した時点から60日以内に速やかに3Mに通知し、製品を3Mに返送する必要があります。返品可否につい

てはカスタマーサービスにお電話にてご連絡いただくか、お近くの3M食品衛生部門までお問い合わせください。

3Mの保証責任範囲

3Mは、直接的・間接的、特殊、偶発的または必然的を問わず、利益損失を含むがこれに限定されないあらゆる損失に対しての責

任を放棄します。いかなる場合においても、あらゆる法的理論に対しても、3Mの保証責任範囲は、欠陥と認められた製品の購入

金額を超えることはありません。

保管

未開封の3M ペトリフィルム EBプレート包装パウチは、8°C以下の温度で冷蔵または冷凍して保管してください。ご使用の際に

は、開封前に3M ペトリフィルム EBプレートの包装パウチを室温に戻してください。未使用の3M ペトリフィルム EBプレートは包

装パウチに戻してください。包装パウチの開口部を折り、粘着テープ等で封をしてください。湿気を避けるために、開封した包装

パウチは再冷蔵しないでください。封をした3M ペトリフィルム EBプレートの包装パウチは、乾燥した冷所で、4週間保存できま

す。封をした3M ペトリフィルム EBプレートの包装パウチは、検査室が25ºCを超えるか、相対湿度50%を超える場合には、冷凍庫

で保管することをお勧めします（下記参照）。（空調管理された施設を除く）

一度開封したプレートを冷凍保存する場合には、密封可能な容器に3M ペトリフィルム EBプレートを入れてください。冷凍され

た3M ペトリフィルム EBプレートを使用する場合には、容器を開け、必要な数のプレートを取り出し、残ったプレートを密封可能な

容器に速やかに戻し、冷凍してください。使用期限を過ぎたプレートは使用しないでください。一度開封したパウチを冷凍保存す

る場合には、自動除霜機能のある冷凍庫には保管しないでください。除霜サイクルにより繰り返し湿気にさらされると、プレート

が損傷する可能性があります。

3M ペトリフィルム EBプレートが変色している場合は、使用しないでください。使用期限と製品ロット番号は、3M ペトリフィルム

EBプレートの包装に記載されています。なお、ロット番号は、3M ペトリフィルム EBプレートにも記載されています。使用期限が

過ぎた3M ペトリフィルム EBプレートは使用しないでください。

廃棄

使用済みの3M ペトリフィルム EBプレートには、バイオハザードをもたらすおそれのある微生物が存在している場合があります。

現行の廃棄基準に従って廃棄してください。

使用方法

すべての指示に、注意深く従ってください。従わない場合、正確な結果が得られないことがあります。

環境検体を含む、食品・飲料（ボトル入り飲料水を除く）検体の調製と培養

検体の準備

1. 適切な滅菌希釈液をご使用ください。

バターフィールドリン酸緩衝希釈水

4

、ペプトン塩希釈液

5

、0.1%ペプトン水

4

、緩衝ペプトン水

5

、第二リン酸カリウム液

5

、生理

食塩水（0.85～0.90%）、重亜硫酸塩無添加リージンブロス、蒸留水。具体的な要件については、「妥当性確認された方法」の

項を参照してください。

クエン酸塩、重亜硫酸塩またはチオ硫酸塩が入っている緩衝液は、菌の成育を阻害する可能性があるので、3M ペトリフィル

ム EBプレートに使用しないでください。標準手順にクエン酸緩衝液が指定されている場合には、上記いずれかの緩衝液に

変更し、40～45°Cに加温して使用してください。

2. 検体を撹拌またはホモジナイズしてください。

3. 菌の成育を確実にするために、検体懸濁液のpHを6.5～7.5に調整してください。酸性の検体は、1N NaOHを用いてpHを調

整します。アルカリ性の検体は、1N HClを用いてpHを調整します。

プレートへの接種

1. 3M ペトリフィルム EBプレートを平らなところに置きます。

2. 上部フィルムを持ち上げ、ピペットを接種領域に対して垂直にし、検体懸濁液1 mLを下部フィルムの中央部に接種します。

3. 気泡が入らないように、上部フィルムを検体の上にゆっくりと戻します。

3

（日本語）

JA

4. 3M™ ペトリフィルム™ スプレッダーの平らな面を下にして、3M ペトリフィルム EBプレートの中央に置きます。 3M ペトリフィル

ムスプレッダーの中央を軽く押し、検体を均等に広げます。ゲル化されるまでに、3M ペトリフィルム EBプレートの成育域内

に広げます。フィルム上で 3 M ペトリフィルムスプレッダーをすべらせないでください。

5. 3M ペトリフィルムスプレッダーを取り外し、3M ペトリフィルム EBプレートをそのまま1分以上置いて、ゲル化させます。

培養

3M ペトリフィルム EBプレートの上部フィルム（透明フィルム側）を上にして、水平な場所で培養します。3M ペトリフィルム EBプ

レートは20枚まで重ねて培養できます。 3M ペトリフィルム EBプレートを24±2時間培養します。各施設の現行の参照方法に応

じて、適した培養時間と温度を選択できます。例については、後述の「妥当性が確認された方法」の項を参照してください。

ボトル入り飲料水検体の調製および培養

3M ペトリフィルムEBプレートの水和

1. 3M ペトリフィルム EBプレートを平らなところに置きます。

2. 上部フィルムを持ち上げ、適切な滅菌希釈水1 mLを下部フィルムの中央に滴下します。適切な滅菌希釈水には、蒸留水、脱

イオン（DI）水、逆浸透（RO）水が挙げられます。

3. 気泡が入らないように、上部フィルムを検体の上にゆっくりと戻します。

4. 3M ペトリフィルムスプレッダーの平らな面を下にして、プレートの中央に置きます。スプレッダーの中央を軽く押し、希釈水を

均等に広げます。ゲル化されるまでに、希釈水を3M ペトリフィルムプレートの成育域内に広げます。フィルム上でスプレッダー

をすべらせないでください。

5. 3M ペトリフィルムスプレッダーを取り外し、プレートは使用するまで1時間以上閉じたままにしておきます。

6. 水和した3M ペトリフィルム EBプレートは密封したパウチまたはプラスチック袋に入れて保存します。遮光し、冷蔵して

（2～8°C）、7日間保存できます。

水の濾過とプレートの培養

1. 以下は、47 mm、孔径0.45 μmのMCE（セルロース混合エステル）フィルターを使用したメンブレンフィルター法による水質分

析の標準的な手順です。

2. 3M ペトリフィルム EBプレートの上部フィルムを静かに持ち上げます。円形の成育域内に触れないように注意します。フィル

ターを水和した部位の中央に置きます。

3. 上部フィルムをメンブレンフィルターの上にゆっくりかぶせます。フィルターと3M ペトリフィルム EBプレートとの間に気泡が

入ったり、隙間ができたりしないように気をつけます。

4. 3M ペトリフィルムスプレッダーか指で、円形の領域全体を端の部分も含めて軽く押します。フィルターとゲルが均等に密着し、

気泡が入らないようにします。

培養

3M ペトリフィルム EBプレートの上部フィルム（透明フィルム側）を上にして、水平な場所で34°C～37°C、24±2時間培養します。

20枚まで重ねて培養できます。

判定

1. 3M ペトリフィルム EBプレートは、標準的なコロニーカウンターか照明付きの拡大鏡を用いて測定できます。周りの白い

フォームダム上のコロニーは数えないでください。作業中に混入した気泡は数えないでください。

2.

黄色の帯域を伴う赤色のコロニーや、黄色の帯域の有無にかかわらず気泡を伴う赤色のコロニーを、

腸内細菌科菌群と判

定します。気泡を伴わず（コロニーと気泡の距離がコロニーの直径よりも離れているもの）、黄色の帯域も伴わないコロニー

は、

腸内細菌科菌

群として測定しません。

3. 成育域は約20 cm

2

です。 3M ペトリフィルム EBプレートに100個を超えるコロニーが存在する場合、2ヵ所以上で1 cm

2

当た

りのコロニー数を測定して、推定値を算出することが可能です。 1 cm

2

当たりの平均値を20倍して、プレート全体のコロニー

数を推定します。

4. コロニーの数が多いと、3M ペトリフィルム EBプレートのゲルの色が濃くなるか、完全に黄色になり、以下の特徴が1つ以上

見られます。 ①小さいコロニーが多数あること、②多数の気泡があること。このような現象が見られた場合、測定不能多数

（TNTC）として記録します。より正確な数値が必要な場合には、さらに希釈を行ってください。

5. 必要に応じ、コロニーを個別に検査します。適切な検査技術に従って上部フィルムを持ち上げ、ゲルからコロニーを釣菌しま

す。規定の手順に従い検査してください。

6. 培養器から取り出してから1時間以内にプレートの計数を行えない場合は、後で計数するために3M ペトリフィルム EBプレー

トを密封容器に入れて冷凍保存することができます。保存は-15°C以下の温度で、1週間以内としてください。

注：メンブレンフィルターを使用する場合、3M ペトリフィルム EBプレートの計数が遅れることは推奨しません。

4

（日本語）

JA

詳細については、「3M™ ペトリフィルム™

腸内細菌科菌

群数測定用プレート解説書」を参照してください。具体的な用途や手順

についてご質問がありましたら、当社のウェブサイト（www.3M.com/foodsafety）をご覧いただくか、3M販売担当者または取り

扱い販売店までお問い合わせください。

妥当性確認された方法

AOAC® O󼴫cial Methods

SM

適応範囲： 2003.01 指定食品における

腸内細菌科菌

群の計数

培養：

3M ペトリフィルム EBプレートは、37°C±1°Cで24±2時間培養します。

AFNOR Certi󼴩cationによるNF Validation

NF Validationにより認証された以下の方法は、ISO 16140-2

6

に従い、ISO 21528-2

7

に対する妥当性確認が行われています。

(3M – 01/6 –09/97)

この試験法を用いる場合には、以下の詳細に従ってください。

適応範囲：すべてのヒト用食品、ペットフード、食品製造環境検体。

検体の準備： ISOに指定の希釈液

5

のみを使用してください。

培養：

3M ペトリフィルム EBプレートを、30°C±1°Cまたは37°C±1°Cで24±2時間培養します。

判定：

ISO 7218

3

に従い、希釈毎に1枚のプレートの結果を用いて、検体に存在する微生物の数を計算します。コロニーが100個以下の

3M ペトリフィルム EBプレートのみを計算の対象とします。推定結果はNF Validationの認証の適用範囲外です（「判定」セクショ

ンの 3 を参照）。

3M 01/06 – 09/97

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS

http://nf-validation.afnor.org/en

有効期限の詳細は、上記のWebサイトにて入手できるNF VALIDATIONの証書を参照してください。

参考文献

1. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Title 21, Part 58. Good Laboratory Practice for

Nonclinical Laboratory Studies.

2. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

3. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stu󼴨s – General rules for microbiological examination.

4. FDA. Bacteriological Analytical Manual (BAM), Reagents Index for BAM found at: http://www.fda.gov/Food/

FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm055791.htm.

5. ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stu󼴨s – Preparation of test samples, initial suspension and

decimal dilutions for microbiological examination.

6. ISO 16140-2. Microbiology of the food chain – Method Validation -- Protocol for the validation of alternative

(proprietary) methods against a reference method.

7. ISO 21528-2. Microbiology of food and animal feeding stu󼴨s – Horizontal methods for the detection and

enumeration of

Enterobacteriaceae

– Part 2: colony count method.

上述の標準試験法については、現行の最新版を参照してください。

記号の説明

www.3M.com/foodsafety/symbols

AOACはAOAC INTERNATIONALの登録商標です。

O󼴫cial MethodsはAOAC INTERNATIONALのサービスマークです。

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