Roche uPath PD-L1 image analysis for NSCLC IVD Algorithm ユーザーマニュアル

ブランド: Roche

モデル: uPath PD-L1 image analysis for NSCLC IVD Algorithm

タイプ: ユーザーマニュアル

非小細胞肺がん用uPath PD-L1 (SP263)画

像分析アルゴリズムガイド

はじめに  1

アルゴリズムの概要と説明  2

使用目的 3

製品の使用目的  3

アルゴリズムガイドの目的  3

臨床上の意義 4

検査の原理  5

制約 6

データの安全性  7

NSCLC用uPathPD-L1画像分析アルゴリズムのワークフロー 8

病理医が行うワークフロー  9

PD-L1画像分析 12

PD -L1の評価  15

P D - L 1アルゴリズムの染色評価  1 5

染色特性 15

性能特性 26

方法の比較 26

病理医再現性の調査 27

スキャナー再現性の調査 28

トラブルシューティング  2 9

参照文献 33

はじめに

非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アル

ゴリズムを搭載したRocheuPathenterprisesoftware(uPath

enterprisesoftware)(NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析

アルゴリズム)は、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)の

正常組織·新生物組織から切除され免疫組織化学(IHC)的に

染色された組織構造切片で、タンパク質の発現を定量評価す

るのを支援するよう設計されています。

uPathenterprisesoftwareはネットワーク型のデジタル病理

学ソフトウェアソリューションで、病理標本のデジタル画像

の収集、管理、表示、分析、共有、報告作成を病理学ラボで

行うことができます。uPathenterprisesoftwareでは、さま

ざまな拡大率のデジタル画像表示、注釈の追加、組織切片の

測定、画像分析、レポートの作成を行うことができます。

注記:NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムは

補助的なコンピュータ支援ソフトウェアで、PD-L1タンパク

質の存在を確かめるためIHC染色された組織標本のスライド

ガラス顕微鏡画像を収集したり測定したりすることを目的と

します。画像分析スコアの妥当性を確保するには、VENTANA

PD-L1(SP263)RabbitMonoclonalPrimaryAntibody手法解

説シート(www.ventana.comで入手可)に記載の適切なコント

ロールを使用し、染色反応が一致することを、病理医の責任

で検証してください。

非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド 1

2 非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド

アルゴリズムの概要と説明

画像分析アプリケーションとしてuPathenterprisesoftware

を使用すると、関心領域(ROI)を1つ以上選択したり輪郭を設

定したりすることが可能で、さまざまな拡大率で個々のROI

を表示し、NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズ

ムで分析することができます。ターゲットの腫瘍細胞(TC)の

総数カウントが算出され、染色されたか否かでTCが階層化さ

れます。NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズム

により、TCの総数(染色·未染色)を分母、染色TCを分子とす

る数値が求められ、PD-L1TC陽性スコアが0～100%の尺度で

生成されます。NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴ

リズムは、特定のROIのスコアも、同じスライドで選択した

すべてのROIの総計スコアも生成することができます。アル

ゴリズムでは、非腫瘍細胞も分析全体の一部として検出さ

れますが、オーバーレイや出力の対象となるのは、TC陽性

スコアの計算に使用されたTCだけです。NSCLC用uPathPD-L1

(SP263)画像分析アルゴリズムで生成されたスコアは、受け

入れることも、別のスコアに置き換えることもできます。ど

のTCがアルゴリズムで陽性/陰性と判定されたかを慎重に見

直し、アルゴリズムが正しいことを確認します。誤ってい

る場合は手動で置き換える必要があります。NSCLC用uPath

PD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムの結果はそれだけでは

データとして不完全で、有資格の病理医が、適切なコントロ

ールを使用した上で、組織学的検査の結果や臨床情報ととも

に使用する必要があります。このアルゴリズムは、PD-L1の

発現率が50%あるかを評価するのを支援するツールとして設

計されています。

使用目的

アルゴリズムガイドの目的

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイドの

目的は下記のとおりです。

•N S C L C用u P at h PD -L1 (S P 2 63)画像分析アルゴリズムの背景情

報、検査原理、制約について説明する。

•必要な材料、IT,データの安全性、ネットワーク要件を明示する。

•N S C L C用u P at h PD -L1 (S P 2 63)画像分析アルゴリズムの実施方法

を順を追って示す。

•N S C L C用u P at h PD -L1 (S P 2 63)画像分析アルゴリズムの使用法が

わかる写真を掲載する。

•V E N TA N APD -L1 (SP 2 6 3) Ass a yで染色されたF F PE N S C LC 切片

で、N S C L C用 u P a t h P D - L 1 (S P 2 6 3)画像分析アルゴリズムを簡単に

行うためのツールについて説明する。

•判断が難しい症例画像例を示し、N S C LC用u Pat h PD -L1 (S P 2 63)

画像分析アルゴリズムをどのように使用して評価するかのガイドラ

インを示す。

•N S C L C用u P at h PD -L1 (S P 2 63)画像分析アルゴリズムの性能特性

を示す。

製品の使用目的

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムは、ホ

ルマリン固定パラフィン包埋のNSCLC組織のPD-L1タンパ

ク質の検出や半定量測定の支援として使用します。さら

に、VENTANAPD-L1(SP263)Assayと組み合わせて使用する

と、薬剤ラベルの治療承認基準に従い、NSCLCの患者を治療

の対象とするかについて、PD-L1TC陽性率が50%以上である

ことを判定基準として振り分けるために使用することもでき

ます。

注記:NSCLC用uPathPD-L1(SP263)「画像分析アルゴリズ

ム」は補助的なコンピュータ支援ソフトウェアで、PD-L1タ

ンパク質の存在を確かめるためIHC染色された組織標本の

スライドガラス顕微鏡画像を収集したり測定したりするこ

とを目的とします。画像分析スコアの妥当性を確保するに

は、VENTANAPD-L1(SP263)Assay手法解説シート(P/N741-

4905)に記載の適切なコントロールを使用し、染色反応が一

致することを病理医の責任で検証してください。

このアルゴリズムは体外診断(IVD)向けです。

非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド 3

臨床上の意義

世界的に見て、肺がんは何十年の間もっとも診断数の多いが

んで、がん死の原因の1位を占めます。新たに見つかるがん

の12.9%に当たると推測され、世界で1年間におよそ176万人

が死亡、つまりがん関連死亡者のほぼ5人に1人に該当しま

す。NSCLCは肺がんの種類のなかでもっとも罹患数が多く、

肺がんのおよそ85%に当たります。NSCLCの病巣は患者の大

半で手術不能で、局所的な進行(ステージIIIB)または転移(

ステージIV)が見られ、どちらのステージでも治療に結び付

く選択肢は今のところありません。進行ステージと診断され

たNSCLCの5年相対生存率は4.7%です。

プログラム細胞死リガンド1(PD-L1)は、活性T細胞で発現

する膜内外タンパク質で、プログラム細胞死1(PD-1)と

B7-1(CD80)という2つの阻害受容体と結合し免疫反応を抑制

します。PD-L1がPD-1と結合すると、T細胞の増殖、サイト

カインの生産と活動が抑制され、T細胞の機能の不活性化や

枯渇につながります。PD-L1は抗原のCD80とも結合し、細胞

の活性化やサイトカインの生産の抑制といった、免疫反応

の抑制を細胞や活性T細胞にもたらします。PD-L1の発現は

免疫細胞やTCで見られます。TCでPD-L1が異常に発現する

と抗腫瘍免疫が妨げられ、免疫回避に陥ると報告されてい

ます。PD-L1やPD-1の経路を遮断する免疫治療の登場によ

り、NSCLCと診断された患者の生存率が向上することが明ら

かになりました。しかし、治療の予後はPD-L1の発現レベル

で左右されるため、免疫組織化学的染色によるPD-L1の定量

が必要です。

免疫組織化学を用いると、特定の抗原が組織検体に存在する

ことが検出できるので、腫瘍を診断したり予後を予測したり

する際の有効なツールとなります。VENTANAPD-L1(SP263)

Assayは、ラボ向けのウサギモノクローナル抗体で、FFPE

正常組織·新生物組織の切片にあるPD-L1タンパクを検出し半

定量するために使用します。組織学的に組織を調製すること

の利点は、無傷組織を用いることで患者検体のPD-L1の陽性

レベルの解釈に形態学を援用できることです。いずれの組織

学的検査も、NSCLC形態学や病理学の専門家が解釈する必要

があります。解釈の結果は形態学的研究や適切なコントロー

ルで補完し、他の臨床データやラボデータも考え合わせる必

要があります。



4 非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド

検査の原理

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムを搭載し

たuPathenterprisesoftwareは、各種の画像分析技術を用い

てTC陽性スコアを取得します。

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムは、

事前設定されたパラメータを用いて、VENTANAPD-L1(SP263)

Assayで染色された組織画像のスコアを算出します。

画像分析の手順

•空白部を識別し分析から自動除外します。

•画像全体から細胞を検出します。

•細胞が T C か別の種類かを分類します。

•染色TCと非染色TCを識別します。

•V E N TA N APD -L1 (SP 2 6 3) Ass a y手法解説シートに従い、 

染色TCの数をTC総数で割ってTC陽性スコアを算出します。

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムでのTC

識別法とスコアの算出法

•N S C L C用u P at h PD -L1 (S P 2 63)画像分析アルゴリズムは、色、

強度、サイズ、形態学的な特徴を用いてTCを識別します。

•識別されたT Cを、V E N T A N A P D - L 1 (S P 2 6 3) A s s a y 手法解説シート

に従い、細胞膜の染色検出と事前設定閾値を用いて分類します。

•染色TCが何パーセントか算出するため、VENTANAPD-L1(SP263)

Assay手法解説シートに従い、染色TCの数をTC総数で割ってTC

陽性スコアを算出します。

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムでの空白

部判定

•アルゴリズムで自動的に空白部を除外します。汚れや引っかき傷、

インクなどのアーチファクトは自動的に除外しません。

•ファルスカラーオーバーレイを用いて、アルゴリズムが判定した領

域が空白部かユーザーが見直すことができます。「PD-L1画像分

析:ファルスカラーオーバーレイ」を参照してください。 

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムで、

TC陽性スコア出力を生成する基準

•N S C L C用u P at h PD -L1 (S P 2 63)画像分析アルゴリズムは、 

小数点以下 1 桁の数値( 4 .8 % など )でスコアを報告します。

•スコアの四捨五入や切り捨ては推奨しません。たとえば、「4.8 %」

を四捨五入して 5 % としてはいけません。 



非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド 5

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズム

は、VENTANAPD-L1(SP263)Assayを使用した場合に機能する

よう設計されています。検査結果に、画像を取得したIHCス

ライドや分析の対象とした二次画像を超える品質や精度は望

めません。

分析用uPathenterprisesoftwareにスライドの画像を取り込

む前に、PD-L1コントロールスライドの顕微鏡検査を手動で

行いVENTANAPD-L1(SP263)Assayの染色を検証し、期待どお

りの結果が得られることを確認する必要があります。

染色を行うたびに、全陽性·全陰性となる品質管理材料も含

めVENTANAPD-L1(SP263)Assay向けのメーカー推奨材料を使

用して検証してください。コントロールスライドが手動の顕

微鏡検査で許容できない場合、結果が許容できるまで組織を

染め直してください。

VENTANAPD-L1(SP263)Assayの解釈は、推奨内容に従う必要

があります。

VENTANAPD-L1(SP263)Assay手法解説シート(P/N1014258EN)

と解釈の手引き(P/N1015317EN)を参照してください。

(www.ventana.comで入手可)。

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムは、適切

なコントロールを使用した上で組織学的検査、臨床情報とと

もに、有資格の病理医のみが使用するよう設計されていま

す。独立型のツールとして設計されていないため、有資格者

が分析工程に加わる必要があります。

取り込まれた画像に異常染色(核や細胞質など)が見られる

と、誤ったスコアがNSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析ア

ルゴリズムで生成されるおそれがあります。

細胞全体の形がどうであれ腫瘍の核が細長いと、NSCLC用

uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムにより拒絶されま

す。そのため、核が細長い細胞を多数含む腫瘍は手動で評価

する必要があるかもしれません。

制約

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムは、

NSCLC組織検体を用いて、訓練、開発、検証を行いました。

ただし、家庭の個人用コンピュータ(PC)を使用してのNSCLC

用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズム、およびその安

全性と有効性は未検証です。

uPathPD-L1SP263画像分析アルゴリズムは、薬剤ラベルの

治療承認基準に従い、NSCLCの患者を治療の対象とするか

を、PD-L1TC陽性率が50%以上であることを判定基準として

振り分けるのを補助するために使用します。

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムは、染色

度の弱い細胞質や細胞膜があると細胞を誤って識別する可能

性があります。また、染色度の強い免疫細胞が腫瘍セルの染

色に重なると、著しい混合にじみとなり、TCの細胞質が赤く

なり、それ以外の細胞の染色状態と同じになります。その結

果、TCが非TCと、非TCが陽性のTCと誤って識別されるおそれ

があります。

マクロファージは、分析領域から除外する必要があります

が、かならずしもすべてを除外できるわけではありません。

その結果、NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズ

ムで生成されたスコアが、分析対象のROIに存在するマクロ

ファージの影響を受けるおそれがあります。患者のスコアが

50%の判定基準の近辺にある場合、その影響は大きな問題で

す。

画像に細かい顆粒が見られる場合、細胞質の染色が広く拡

散することがあります。めったにありませんが、さまざま

な強度の点状染色が核周辺に見られることもあります。腫

瘍細胞膜の信号強度が合計で何パーセントかは目視で推定

し、PD-L1の発現レベルを生成するために使用されます。腫

瘍細胞の細胞質の染色状態は、PD-L1の発現判定で考慮され

ません。イソタイプ一致の負のコントロール抗体を使用し

て、検査検体でバックグラウンドが存在するかを評価し、

染色強度のベースラインを確定します。

6 非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド

データの安全性

悪質なソフトウェアや機器への不正アクセスにより、データ

が損失したり機器が使用不能になったりするおそれがありま

す。

悪質なソフトウェアや機器への不正アクセス、機器の誤用を

回避するには、下記の推奨内容を守ることが重要です。

•他のソフトウェアを、機器にインストールしたり実行したりしないで

ください。

•悪質なソフトウェアや不正アクセスに対し、ネットワーク上の他のコ

ンピュータやサービスに適切な保護を施し防護するようにしてく

ださい。たとえば、ラボ情報システム( L I S )の構築、アーカイブの共

有、バックアップの共有やサービスの利用をお勧めします。

•ローカルエリアネットワークのセキュリティ、特に悪質なソフトウェ

アや攻撃からシステムを保護するのは、お客様の義務になります。

保護のため、ファイアウォールなどを設け、制御下にないネットワ

ークからデバイスを切り離すのも一案です。また、接続ネットワーク

から悪質なコードを確実に排除することも選択肢のひとつです。

•機器及びすべての付属ITインフラストラクチャ(コンピューター、ケ

ーブル、ネットワーク機器など)への物理的なアクセスを制限して

ください。

•機器のバックアップファイルとアーカイブファイルが不正なアクセス

や災害から保護されていることを確認してください。リモートの格

納場所、災害発見サイト、バックアップファイルの安全な転送も保

護対策に含まれます。

•可能であればファイアウォールを使用し、ネットワークの通信量を

制限してください。

•U S Bドライブを使用し何らかの種類のデータのバックアップや復元

に利用することもできます。U S Bドライブを不適切に扱うと、データ

の損失や機器の誤動作の原因となります。

•ロシュの担当サービス代理店がテストを行いインストールした U S B

ドライブのみを使用してください。

•USBデバイスは1度に1つしか使用できません。USBドライブに挿入す

る前に、他の U S B デバイスが入っていないか確認してください。

•U S B デバイスを外す際、W i n d o w s の取り出しボタンを選択してくだ

さい。

•サーバーのオペレーティングシステム(OS)のデフォルト設定は変え

てはいけません。変えると、堅牢な O S 設定に影響します。 

•uPathenterprisesoftwareのウイルス感染を防ぐには、機器

のUSBドライブのみを使用してください。作業データ以外を機器の

U S Bドライブで保存しないでください。

非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド 7

N S C L C 用 u P a t h P D - L 1 画像分析アルゴリズムのワークフロー

必要な材料

•u Pat h ent e r p r is e s oft w a r e

•NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズム

•B e n c h M a r k U LT R A 機器を用いてV E N TA N A P D -L1 (SP 2 6 3) A ss ay(O ptiView D A B IH C D et e ctio n K itを使用)で染色されたN SC L C 組織のス

ライド

•V E N TA N AD P 2 0 0スライドスキャナー

ワークフロー

1.ガラスのスライドに乗せたNSCLC組織検体が、BenchMarkULTRA機器を用いてVENTANAPD-L1(SP263)Assayで染色されます。

2.( スライドスキャンと平行して )ひとつの Z 面の画像が 2 0 x の倍率で V E N T A N A  D P  2 0 0 スライドスキャナにより収集されます。

3.デジタル画像が収集されると、V EN TAN ADP200スライドスキャナーに接続したコンピュータから中央サーバーの画像管理システム(IM S)に

転送されます。

4.サーバーへの転送後、u P a t h e n t e r p r i s e s oft w a r eで症例が作成されます。症例の作成は、ガラスのスライドに貼付のバーコードラベル又

はuPathenterprisesoftwareに手入力された識別情報(組織の種類、一次抗体など)を用いて、ラボ情報システム(LIS)を介し自動的に

行うようにできます(u Pa t h e nter pr is e soft w a reユーザーガイド(P N 1018943JA)を参照)。

5.NS C L C用u P at h PD -L1 (S P 2 6 3)画像分析アルゴリズムがインストールされていて(u P at h e nt e r p r is e so ft w a r e、IM Sとは別のサーバーにイ

ンストールする必要あり)、適切な染料と組織の種類が写った画像が20xの倍率で収集されると、uPathenterprisesoftwareでスライド

全体の分析(WSA)が自動的に起動します。

6.スキャン画像全体が W S Aで自動的に分析されます。

7.W SAが終了すると、u P ath e n t e r prise s o ft w a r eに[a na lysis is co m plet e（分析終了）]と表示されます。この時点で、スコアの対象とす

る特定のROIを選択できるようになります。ROIは、ひとつでも複数でも任意のサイズで選択可能です。複数のROIを選択すると、ROIごとの

個別スコアだけではなく全 R O Iの総計スコアも表示されます。

染色

•組織の調製と染色は、V E N TA N A P D -L1 (S P 2 6 3)A s s ay手法解説シートの推奨方法に従う必要があります。

•適切なコントロールすべてを使用して染色状態を観察し、V E N TA N A PD -L1 (S P 2 6 3)A ss ay手法解説シートにまとめたガイドラインに適合

しない場合、スライドを再染色する必要があります。

•組織を染色し分析するには、N S C L C用u P at h PD -L1 (S P 2 6 3)画像分析アルゴリズムにV E N TA N A PD -L1 (S P 2 6 3) Ass a yを使用し、V E N TA N A 

PD-L1(SP263)Assay手法解説シートに記載の追加材料や支給品を使用する必要があります。BenchMarkULTRA機器を用いてOptiView

DABIHCDetectionKitで染色されたFFPENSCLC組織のPD-L1タンパク質が、VENTANAPD-L1(SP263)Assayで検出されます。VENTANA

PD-L1(SP263)Assayでは、3機種あるBenchMarkULTRA機器で染色されたFFPENSCLC組織のPD-L1タンパク質が検出されますが、NSCLC

用u Pat h PD -L1 (S P 2 6 3)画像分析アルゴリズムの検証には、B e n ch M a rk U LT R A機器で染色されたO ptiVie w DA B I H C D et e ction Kitを用

いました。

画像の取込み

スライドをスキャンするにはVENTANADP200スライドスキャナーが必要です。画像は、20xの倍率でスキャンする必要があり

ます。画像の大部分が焦点から外れている場合、スライドを再スキャンするようお勧めします。スキャンの詳細は、VENTANA

DP200スライドスキャナーユーザーマニュアル(PN1017149JA)を参照してください。

uPathenterprisesoftware全般の操作方法

uPathenterprisesoftwareは、個人や施設のニーズに応じてレポート構成やユーザーインターフェースをカスタマイズでき

るよう設計されています。このアルゴリズムガイドは、NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムに必要なツールに

的を絞って説明しています。本ガイド以外のuPathenterprisesoftwareに関する情報は、uPathenterprisesoftwareユーザ

ーガイドを参照してください。

8 非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド

病理医が行うワークフロー

症例の開始

VENTANAPD-L1(SP263)Assayで染色されたNSCLC組g織の画像は、症例をダブルクリックするか、症例を選択しuPath

enterprisesoftwareの[Viewer(ビューワー)]タブを押すかしてアクセスすることができます(図1)

症例に関連する画像がすべて画面に表示されます(図2)。

図2

図1

非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド 9

VENTANAPD-L1(SP263)Assayで染色されたガラスのスライドが、20xの倍率でVENTANADP200スライドスキャナーでスキャン

されると、画像がuPathenterprisesoftwareにインポートされ症例に関連付けられます。NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分

析アルゴリズムでWSAが自動的に起動します。WSAの事前計算に必要な時間は、サーバーの仕様、画像のサイズ、待ち行列に入

っている画像数により異なります。[waitingtostartauto-analysis(自動分析開始の待機中)]と表示された場合、画像が

待

ち行列に入っていてまだ分析されていないことを意味し、WSAの実行中は[analyzing(分析中)]と表示されます(図3と図4)。

uPath

enterprisesoftwareのWSAで画像の分析が完了すると、uPathenterprisesoftwareのビューワー内のスライド画像下部に

[analysissuccessful(分析成功)]と表示されます(図5)。画像のスコアは、WSAが正常に終了しないと生成されません。

腫瘍全体を囲むROIの描画:腫瘍領域の選択

ROIドロップダウンメニューの[Freehand(フリーハンド)]ツールボタン(図6)を使用し、分析対象のIHCスライド画像で腫瘍領

域を選択してください。図7は、ROIをひとつ描画した状態の画像です。ROIをさらに描画し追加することができます。

領域を選択するごとに、ROIが[SlidePanel(スライドパネル)](図8)に表示されます。

図6 図7

図8

図5

図4

図3

10 非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド

腫瘍全体を囲むROIの描画:領域の除外

ROIを描画する際、ある領域を除外する必要があるかもしれません。避けたり除外したりする特定の領域は、例示の画像以

外でも、染色特性表示部で下図のように処理されます。[Exclusion(エクスクルージョン)]ドロップダウンメニュー(図9)の

[Freehand(フリーハンド)]除外ツールを使用し、特定の領域を除外してください(図10)。画像の大部分がぼやけていたり焦点

が合っていない場合は、スライドを再スキャンしてください。

除外した領域はアルゴリズムで分析されず、その領域にあるTCは、染色·非染色に関係なく分析領域全域から除外されま

す。ROIの分析完了後に除外を行うとROIの再分析が必要になり、オーバーレイとスコアが適宜更新されます。

多数の除外領域を描画した場合([Freehand(フリーハンド)]で複雑に描画した場合は特に)、A時間がかかりワークフローの効率

に悪影響を及ぼすわりに、最終スコアへの影響は微々たるものです。症例で多数の領域除外が必要な場合、下記のように

処理してください。

•複数のROIを描画しスコア対象外とする部分を組織から[E xclu sion(除外)]する際、ツールの使用を必要最小限にとどめる。

•除外する数を制限し、スコアを手動で置き換える。

腫瘍全体を囲むROIの描画:削除

腫瘍全体を囲む選択したROIが最適でない場合、ROIを削除することができます。画像でROIの中心をクリックして腫瘍全体を

囲むROIを選択し、[SlidePanel(スライドパネル)](図11)又はROIの近くにあるスライド画像内の[Delete(デリート)]ボタン

をクリックしてください(図12)。確定ウィンドウが表示されます。選択したROIを削除するには[Confirm(コンファーム)]を選

択してください。ROIを維持するには[Cancel(キャンセル)]を選択してください。

図10図9

図11 図12

非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド 11

腫瘍全体を囲むROIや除外領域を描画すれば、画像分析の準備完了です。分析対象のROIの中心をクリックするか、[Slide

Panel(スライドパネル)]にあるROIをクリックするかして、腫瘍全体を囲むROIを選択してください。ROIごとに、[Slide

Panel(スライドパネル)](図}13)又はROIの隣(図14)にある[ImageAnalysis(画像分析)]ボタンを選択してください。

PD-L1分析が完了すると、結果が[SlidePanel(スライドパネル)]の2か所([SlideScore(スライドスコア)]下部、ROIの隣)に

表示されます(図15)。[SlideScore(スライドスコア)]は、選択したすべてのROIを合算した陽性腫瘍細胞率で、この数値がレ

ポートに表示されます。

PD-L1画像分析

図15

詳細情報は、フリップアウトアイコン(図16)をクリックすると、[SlideScore(スライドスコア)]のフリップアウトや[ROI

Details(ロイディーテイル)]フリップアウトに表示されます。[SlideScore(スライドスコア)]のフリップアウトが表示され

ます(図17)。同じフリップアウトアイコンをもう一度クリックすると、情報が非表示になります。

図17

図16

図13 図14

12 非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド

PD-L1画像分析:ファルスカラーオーバーレイ

ROIを選択し[Analysis(アナリシス)]ボタンを押し組織が分析されると、カラーのオーバーレイがROIに表示されます。下に示

す画像(図18)で、赤い丸は染色でPD-L1陽性と判定された細胞を、青い丸は染色でPD-L1陰性と判定された細胞を表します。

画像をつかむと(マウスを左クリックし画像を移動)、オーバーレイが非表示になります(図19)。マウスボタンを放すと、オー

バーレイが再表示されます(図18)。

図18

図19

非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド 13

スライドスコアを手動入力で置き換える

[SlideScore(スライドスコア)]のフリップアウトアイコンをクリックすると、[SlideScore(スライドスコア)]の隣の[Slide

Panel(スライドパネル)]でスコアを手動で置き換えることができます(図16)。[SlideScore(スライドスコア)]のフリップ

アウトが表示されます(図20)。[SlideScore(スライドスコア)]のフリップアウトで[EDIT(エディット)]ボタン(図20)を選

択すると、別のスコアを手動で入力することができます(図21)。症例に関する注記や、自動取得スコアを置き換えた理由を

[Comments(コメント)]欄に追加することができます。PD-L1では、0～100%の範囲でスコアを手動入力できます。手動でスコア

を置き換えたら[CONFIRM(コンファーム)]を選択してください(図22)。確認のためメッセージが表示されたら、[Yes(イエス)]

を選択してください。



手動で置き換えたスコアが[SlidePanel(スライドパネル)]内に表示されます。ROIの隣に表示されていた画像分析スコアは、

もう存在しません(図23)。棒グラフのボタンを押すと、画像を再分析することができます(図13、図14)。

図21 図22

図20

図23

14 非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド

VENTANAPD-L1(SP263)Assay手法解説シートと解釈の手引きをご覧ください。

PD-L1の評価

VENTANAPD-L1(SP263)Assayで標識を付けたNSCLC新生物細胞は、強度を問わず細胞膜が染色されたTCが何パーセントあるか

について評価されます。NSCLCは、細胞膜や細胞質が免疫組織化学的に染色され、染色状態は新生物全体で均一な場合も不均

一な場合もあります。腫瘍細胞の細胞質が染色されていても、TC陽性スコアの計算から除外されます。細胞膜の染色は、断続

していたり円周形だったり基底外側に見られたりします。イソタイプ一致の負のコントロール抗体を使用して、検査検体でバ

ックグラウンドが存在するかを評価します。

PD-L1アルゴリズムの染色評価

NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムを行うには、VENTANAPD-L1(SP263)Assayでスコアをマニュアルで求め

る方法を十分に理解する必要があります。[Freehand(フリーハンド)]ツールを用いて腫瘍全体を囲む必要があります。NSCLC用

uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムを行う前に、分析に必要なH&E染色と陰性コントロールスライド染色を行い、結果

を参照する必要があります。分析対象の領域を選択する際、制約及び除外すべき領域の節に記載の制約事項を考慮に入れてく

ださい。NSCLC用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムが生成したスコアに同意しない場合、別のスコアと置き換える必

要があります。

腫瘍の生存能力が不十分、形態が不適格、バックグラウンド干渉があるなどに該当する症例は受け入れられません。TCの生存

能力が十分にあるNSCLC症例(病理医がスコアで判断)でPD-L1IHCスライドで干渉バックグラウンドが見られない場合、評価の

対象として受け入れ可能です。

染色特性

非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド 15

図24:uPath enterprise softwareに取り込まれた、NSCLCのIHC染色組織画像のスキャン画像。上が分析前、下が分

析後。赤いオーバーレイは、染色陽性TCと判定された細胞を、青いオーバーレイは、染色陰性TCと判定された細胞を

表す。

下図(図24、図25)に、さまざまな染色パターンとPD-L1の発現レベルを示します。TCのPD-L1発現はパーセント(0～100)で報告

されます。

16 非小細胞肺がん(NSCLC)用uPathPD-L1(SP263)画像分析アルゴリズムガイド

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Roche uPath PD-L1 image analysis for NSCLC IVD Algorithm ユーザーマニュアル

ブランド: Roche

モデル: uPath PD-L1 image analysis for NSCLC IVD Algorithm

タイプ: ユーザーマニュアル

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Roche uPath PD-L1 image analysis for NSCLC IVD Algorithm ユーザーマニュアル

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