ver.20221202J
株式会社レゾナック (https://www.shodex.com/)
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使用可能な溶媒は、以下の通りです。
(1) フタル酸、サリチル酸、4-ヒドロキシ安息香酸、酒石酸、クエン酸などの水溶液を使用します。
(2) 溶離液の濃度、 pH、溶離液の種類などを変えることにより、試料の溶出時間や溶出順序を変えることが可能です。
(3) 基本の溶離液は、2.5 mM フタル酸 + 2.4 mM Tris + 16.2 mM ホウ酸水溶液です。ホウ酸はリン酸イオンと
フッ化物イオンの分離改善に有効です。具体的な調製方法は「5. 溶離液の調製」を参照ください。
(4) アセトニトリルやメタノールは、20 % (v/v)まで添加可能です。
警告 ※ホウ酸[Cas No. 10043-35-3/11113-50-1]は、REACH 規則の高懸念物質(SVHC)リストに収載された
認可対象物質の候補物質です。ホウ酸を含む溶離液の廃棄には十分に配慮してください。
注意 ※使用条件を順守してください。使用可能範囲外での使用は、カラムを劣化させるおそれがあります。
※pH7 以上のアルカリ性溶離液は、炭酸ガスの吸収により溶離液の pH が変化しやすくなるため、
炭酸ガストラップを溶離液の容器の入口につけることをお勧めします。一般的には、pH の変化が少ない
酸性溶離液の使用をお勧めします。
※カラム圧力は、溶離液組成、流量、カラム温度によって変動します。溶離液の組成を変更する場合は、
使用可能最大圧力を超えないように流量やカラム温度を調整してください。
5. 溶離液の調製
(1) (基本の溶離液の場合)1 L メスフラスコにフタル酸(特級グレード)0.415 g、Tris (特級グレード)0.29 g、
ホウ酸(特級グレード)1.00 g を量り取り、水を加えて 1 L とします。メスフラスコを超音波にあてて試薬を完全に
溶解させてください。
(2) 気泡の発生を防ぐため、溶離液は十分に脱気してください。
(3) 微細なゴミや不溶物が混在すると、カラムの性能低下やクロマトグラムのノイズの原因となりますので、メンブラン
フィルター(0.45 μm)で溶離液をろ過してください。
注意 ※水は、超純水製造装置で用時調製した水や開封直後の HPLC グレードの蒸留水を使用してください。
有機溶媒は、HPLC で問題無く使用できる品質が保証された HPLC グレードの使用をお勧めします。
異なるグレードの有機溶媒を用いる場合は、分析に適した品質であることを確認してから使用して
ください。なお、開封後、長時間経過したものは使用しないでください。変性や吸湿、汚染などが起きて
いる可能性があります。
※長期間保存した溶離液は使用しないでください。組成の変化などにより、溶出挙動の変化やカラムの
劣化につながるおそれがあります。
参考 ※オンラインで脱気が可能なデガッサの使用をお勧めします。
6. 試料の調製
(1) 粒子状物質(不溶性物質)の目詰まりによるカラムの劣化もしくは性能の低下を防ぐため、試料はあらかじめ
メンブランフィルター(0.45 μm)などでろ過してください。
(2) 試料注入量はカラム 1本あたり 100 μL以下が目安です。
(3) タンパク質を含む試料は、除タンパクを行ってください。除タンパクは、限外ろ過膜を通す方法が適しています。
(4) 疎水性不純物を含む試料は、固相抽出などで除去してください。
注意 ※試料を溶離液と異なる溶媒で溶解させた場合、溶離液に不溶な成分が存在すると注入後に析出
してカラムを詰まらせるおそれがあります。
※試料濃度が高すぎたり、試料注入量が多すぎるとカラム本来の性能が十分に発揮できず、ピーク形状の
異常や分離不良、再現性の低下などにつながるおそれがあります。そのような場合は、試料溶液の希釈
や注入量の減少を適宜行ってください。
参考 ※分析カラム保護のため、ガードカラムの使用をお勧めします。