ver.20221202C
株式会社力森诺科 (https://www.shodex.com/)
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可用溶剂如下。
(1) 基本流动相为磷酸盐、醋酸盐、Tris 盐酸等各种添加了盐的缓冲溶液。
(2) 也可以使用氯化钠、硫酸钠、硫酸钾、硫酸铵等盐。添加的盐浓度请控制在 0.1 ~ 0.3 M。总盐浓度请控制在
1 M 以下。
(3) 使用乙腈、甲醇、乙醇、2-丙醇(IPA)作为流动相时,浓度可用至 100 %。
(4) 也可以使用尿素和 6 M 盐酸胍等蛋白质变性剂以及溶解膜蛋白的 SDS 和Brij-35 等表面活性剂。但是,变
性剂和表面活性剂容易在色谱柱中残留,请作为专用色谱柱使用。
注意 ※请遵守使用条件,在可用范围之外使用可能会导致色谱柱性能下降。
※当使用缓冲液(或含盐的水溶液)和有机溶剂的混合溶液作为流动相时,请务必防止盐的析出。
※当使用高腐蚀性的盐类如氯化钠时,在分析结束后请冲洗设备和色谱柱,以确保没有盐的残留。
否则设备和柱子的金属部件可能会生锈。
※由于尿素和盐酸胍溶液粘度很高,请使用 0.5 mL/min 以下的流速。
※柱压随流动相组成、流速和柱温而变化。在改变流动相组成时,要调整流速和柱温,使其不超过最
大可用压力。
5. 流动相的配制
(1) 流动相请充分脱气防止有气泡。
(2) 流动相中含有不溶的杂质可能会导致色谱柱性能下降和色谱图噪声,因此请使用滤膜(0.45 μm)过滤流动相。
注意 ※使用水时,请使用超纯水装置新配制的水或者刚开封的 HPLC 级蒸馏水。使用有机溶剂时,请使用
HPLC 级以上的试剂。使用品质不同的有机溶剂时,使用前请确认其品质适合分析。开封时间长的
有机溶剂可能有性质改变、吸湿、污染的问题,请不要使用。
※请勿使用已长时间保存的流动相,组成的变化可能导致洗脱行为的变化和色谱柱的劣化。
参考 ※建议使用具有在线脱气功能的脱气机。
6. 样品的配制
(1) 尽量使用流动相溶解和稀释样品。如果难以溶解在流动相中,请尽量和流动相组成接近。
(2) 为了防止由于颗粒物(不溶物)的堵塞导致色谱柱变差,劣化或性能变差,请使用滤膜(0.45 μm)过滤样品。
(3) 样品进样量为 20 ~ 100 μL。
注意 ※样品使用非流动相溶剂溶解时,如果含有不溶于流动相的物质,可能会产生进样后堵塞色谱柱的情
况。
※如果样品浓度过高,过量进样可能导致色谱柱无法发挥原有性能,造成峰型异常、分离不良或再现
性不好等情况。如有这种情况,可以稀释样品溶液或者减少进样量进行调整。
参考 ※为了保护分析柱,建议使用保护柱。
7. 色谱柱的使用方法
7-1. 流路中的溶剂置换
安装色谱柱前请先将设备中的流路充分洗净,完全置换成流动相。另外,请切换阀清洗并置换进样器的流路
(进样环)。 置 换不互溶或溶解性低的溶剂时,先使置换成双方溶剂都能互溶的溶剂,再置换成使用溶剂。
注意 ※色谱柱不能使用的溶剂在流路中残留可能会造成色谱柱的劣化。
※流动相组成发生显著变化,可能造成泵、管路中的污垢脱落,可能会造成色谱柱的劣化。