ver.20221202C
株式会社力森诺科 (https://www.shodex.com/)
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可用溶剂如下。
(1) 可以使用邻苯二甲酸、水杨酸、4-羟基苯甲酸、酒石酸、柠檬酸等酸的水溶液。
(2) 通过改变流动相的浓度、pH 值、流动相的种类,可以改变样品的洗脱时间和洗脱顺序。
(3) 基本的流动相为 2.5 mM 羟基苯甲酸 + 2.4 mM Tris + 16.2 mM 硼酸水溶液。硼酸用于改善磷酸根离子和
氟离子的分离。详细配制方法请参照第 5节“流动相的配制”。
(4) 乙腈或者甲醇的最大添加量为 20 % (v/v)。
警告 ※硼酸[Cas No. 10043-35-3/11113-50-1]是 REACH 法则中的高度关注物质 (SVHC) 清单中收录
的认可对象物质的的候选物质。处理含有硼酸的流动相时请充分注意。
注意 ※请遵守使用条件,在可用范围之外使用可能会导致色谱柱性能下降。
※pH 值大于 7的碱性溶液,易于吸收二氧化碳导致流动相 pH 值变化,建议在流动相容器的入口处
安装二氧化碳气体捕集装置。一般建议使用 pH 值变化较小的酸性溶剂。
※柱压随流动相组成、流速和柱温而变化。在改变流动相组成时,要调整流速和柱温,使其不超过最
大可用压力。
5. 流动相的配制
(1) (基本流动相)称取邻苯二甲酸(优级纯)0.415 g 、Tris(优级纯)0.29 g、硼酸(优级纯)1.00 g 置于 1
L容量瓶中,加水至 1 L,超声处理使试剂完全溶解。
(2) 流动相请充分脱气防止有气泡。
(3) 流动相中含有不溶的杂质可能会导致色谱柱性能下降和色谱图噪声,因此请使用滤膜(0.45 μm)过滤流动相。
注意 ※使用水时,请使用超纯水装置新配制的水或者刚开封的 HPLC 级蒸馏水。使用有机溶剂时,请使用
HPLC 级以上的试剂。使用品质不同的有机溶剂时,使用前请确认其品质适合分析。开封时间长的
有机溶剂可能有性质改变、吸湿、污染的问题,请不要使用。
※请勿使用已长时间保存的流动相,组成的变化可能导致洗脱行为的变化和色谱柱的劣化。
参考 ※建议使用具有在线脱气功能的脱气机。
6. 样品的配制
(1) 为了防止由于颗粒物(不溶物)的堵塞导致色谱柱变差,劣化或性能变差,请使用滤膜(0.45 μm)过滤样品。
(2) 标准样品的进样量为每柱 100 μL以下。
(3) 含有蛋白质的样品,请先进行除蛋白处理。可以使用超滤膜的方法进行除蛋白。
(4) 含有疏水性杂质的样品,请先用固相萃取柱去除杂质。
注意 ※样品使用非流动相溶剂溶解时,如果含有不溶于流动相的物质,可能会产生进样后堵塞色谱柱的情
况。
※如果样品浓度过高,过量进样可能导致色谱柱无法发挥原有性能,造成峰型异常、分离不良或再现
性不好等情况。如有这种情况,可以稀释样品溶液或者减少进样量进行调整。
参考 ※为了保护分析柱,建议使用保护柱。
7. 色谱柱的使用方法
7-1. 流路中的溶剂置换
安装色谱柱前请先将设备中的流路充分洗净,完全置换成流动相。另外,请切换阀清洗并置换进样器的流路
(进样环)。 置 换不互溶或溶解性低的溶剂时,先使置换成双方溶剂都能互溶的溶剂,再置换成使用溶剂。
注意 ※色谱柱不能使用的溶剂在流路中残留可能会造成色谱柱的劣化。
※流动相组成发生显著变化,可能造成泵、管路中的污垢脱落,可能会造成色谱柱的劣化。