ver.20221202J
株式会社レゾナック (https://www.shodex.com/)
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使用可能な溶媒は、以下の通りです。
(1) 基本の溶離液は、リン酸塩、酢酸塩、トリスなどの各種緩衝液に塩を添加して使用します。
(2) 塩としては、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸アンモニウムなどが使用可能です。添加する塩の
濃度は、0.1 ~ 0.3 M が適当です。全塩濃度は 1 M以下にしてください。
(3) アセトニトリル、メタノール、エタノールは、100 %まで使用可能です。
(4) タンパク質の変性剤である尿素や 6 M 塩酸グアニジン、膜タンパク質の可溶化に用いられる SDS やBrij-35
などの界面活性剤も使用可能です。ただし、変性剤や界面活性剤はカラムに残留することがありますので、専用
カラムとして使用することをお勧めします。
注意 ※使用条件を順守してください。使用可能範囲外での使用は、カラムを劣化させるおそれがあります。
※緩衝液(または塩の水溶液)と有機溶媒の混合溶媒を使用する場合は、塩が析出しないことを確認して
ください。
※塩化ナトリウムなど腐食性の高い塩を使用する場合は、分析終了後、装置やカラムに塩が残らないように
洗い流してください。装置やカラムの金属部分が錆びるおそれがあります。
※尿素や塩酸グアニジンの溶離液は粘度が高いため、0.15 mL/min 以下の流量で使用してください。
※カラム圧力は、溶離液組成、流量、カラム温度によって変動します。溶離液の組成を変更する場合は、
使用可能最大圧力を超えないように流量やカラム温度を調整してください。
5. 溶離液の調製
(1) 気泡の発生を防ぐため、溶離液は十分に脱気してください。
(2) 微細なゴミや不溶物が混在すると、カラムの性能低下やクロマトグラムのノイズの原因となりますので、メンブラン
フィルター(0.45 μm)で溶離液をろ過してください。
注意 ※水は、超純水製造装置で用時調製した水や開封直後の HPLC グレードの蒸留水を使用してください。
有機溶媒は、HPLC で問題無く使用できる品質が保証された HPLC グレードの使用をお勧めします。
異なるグレードの有機溶媒を用いる場合は、分析に適した品質であることを確認してから使用して
ください。なお、開封後、長時間経過したものは使用しないでください。変性や吸湿、汚染などが起きて
いる可能性があります。
※長期間保存した溶離液は、使用しないでください。組成の変化などにより、溶出挙動の変化やカラムの
劣化につながるおそれがあります。
参考 ※オンラインで脱気が可能なデガッサの使用をお勧めします。
6. 試料の調製
(1) 試料の溶解および希釈には、できるだけ溶離液を用いてください。溶離液に溶解しにくい場合は、可能な限り
溶離液組成に近づけるようにしてください。
(2) 粒子状物質(不溶性物質)の目詰まりによるカラムの劣化もしくは性能の低下を防ぐため、試料はあらかじめ
メンブランフィルター(0.45 μm)などでろ過してください。
(3) 試料注入量は 5 ~ 10 μL が適切です。
注意 ※試料を溶離液と異なる溶媒で溶解させた場合、溶離液に不溶な成分が存在すると注入後に析出
してカラムを詰まらせるおそれがあります。
※試料濃度が高すぎたり、試料注入量が多すぎるとカラム本来の性能が十分に発揮できず、ピーク形状の
異常や分離不良、再現性の低下などにつながるおそれがあります。そのような場合は、試料溶液の希釈
や注入量の減少を適宜行ってください。
参考 ※分析カラム保護のため、ガードカラムの使用をお勧めします。