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色谱柱使用说明
Shodex OHpak SB-2000 系列
（为充分发挥色谱柱性能并保持长期稳定的使用，请在使用前仔细阅读使用说明。）
使用注意事项 ＜重要＞
警告 ※当取用用于分析的溶剂和试剂时，请确认制造商发出的安全数据表(SDS)，并遵守使用的注意事项，
否则可能会导致严重伤害或死亡。
※在取用有机溶剂、酸和碱等试剂时，应穿戴防护设备，如防护眼镜和手套，避免与人体直接接触，
存在化学伤害的风险。
使用前
(1) 检查色谱柱的包装和外观是否有异常。
(2) 检查色谱柱盒、柱身标签上的产品名称和序列号(Serial no.或S/N)。
(3) 出厂检测报告(CERTIFICATE OF ANALYSIS)请在Shodex官方网站点击出厂检测报告下载进行下载。下载
时需要输入产品序列号。
出厂检测报告下载链接 https://www.shodex.com/download/
1. 前言
感谢您购买Shodex的产品。
Shodex OHpak SB-2000 系列是水溶性尺寸排阻色谱柱。适用于各种水溶性高分子、蛋白质、低聚物的制备。我
们有一系列排阻限不同的产品，可以根据样品的分子量范围进行选择。
2. 色谱柱各部分名称
请参照Shodex官方网站。
参照链接 https://www.shodex.com/cn/da/07.html
3. 色谱柱规格
订货号 产品名称 尺寸
(mm)
粒径
(μm)
理论塔板数
(1 根色谱柱)
排阻限分子量*１
（普鲁兰换算）
内径
长度
F6516011
OHpak SB-2002
20.0
300
15
≥
9,000
1,000
F6516012
OHpak SB-2002.5
20.0
300
10
≥
12,000
10,000
F6516013
OHpak SB-2003
20.0
300
10
≥
12,000
100,000
F6516014
OHpak SB-2004
20.0
300
18
≥
12,000
1,000,000
F6516015
OHpak SB-2005
20.0
300
20
≥
12,000
(4,000,000)
*2
F6516016
OHpak SB-2006
20.0
300
20
≥
12,000
(20,000,000)
*2
F6516017
OHpak SB-2006M
20.0
300
20
≥
12,000
(20,000,000)
*2
F6709555
OHpak SB-G 8B
8.0
50
18
（保护柱）
－
SB-2006M是适合分析分子量分布广的样品的混合填料色谱柱
*1 参考值
*2 ( )内估算值
填料
：
聚羟基甲基丙烯酸酯多孔颗粒
色谱柱材质
：SUS-316
色谱柱末端螺母
：
外螺纹型
No.10-32 UNF
出厂
储存溶剂
：0.02 %
叠氮化钠水溶液
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4. 使用条件
4-1. 基本条件
4-2. 可使用溶剂
产品名称
最大浓度
(%)
甲醇 乙腈 N,N-二甲基甲酰胺
(DMF)
OHpak SB-2002
0
0
0
OHpak 2002.5 ~ SB-2006M,
OHpak SB-G 8B
50 50 50
(1) 可以使用磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、Tris 等缓冲溶液和氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸铵等各种
盐的水溶液。也可以两种混合使用。总盐浓度请控制在 0.5 M 以下，通常建议使用 0.05 ~ 0.3 M 的浓度。
(2) 也可以使用蛋白质变性剂如尿素和盐酸胍的水溶液。但是这些水溶液通常使用高浓度，溶剂置换时可能导致
色谱柱劣化，建议作为专用色谱柱使用。
(3) 也可以添加 SDS 和Brij-35 等表面活性剂。但是，表面活性剂容易在色谱柱中残留，使用后更换溶剂比更换
一般溶剂需要更多时间。使用 30 ~ 50 % (v/v)的甲醇水溶液置换，可以在较短时间内完成。（SB-2002 不可
以使用有机溶剂。）
注意 ※请遵守使用条件，在可用范围之外使用可能会导致色谱柱性能下降。
※当使用缓冲液（或含盐的水溶液）和有机溶剂的混合溶液作为流动相时，请务必防止盐的析出。
※添加氯离子时，请在 pH 大于 6的条件下使用。
※当使用高腐蚀性的盐类如氯化钠时，在分析结束后请冲洗设备和色谱柱，以确保没有盐的残留。
否则设备和柱子的金属部件可能会生锈。
※不要使用硼酸盐缓冲液，因为它会与填料中的二醇基团形成络合物。
※柱压随流动相组成、流速和柱温而变化。在改变流动相组成时，要调整流速和柱温，使其不超过最
大可用压力。
※高分子的分子量越大越容易引起分子链断裂。如果分子链断裂测试结果会比实际值小，造成再现性
差的问题。在可能引起分子链断裂的时候，请降低分析流速。
产品名称 流速
(mL/min)
耐压
(MPa/色谱柱) pH 范围 温度范围
(℃)
常用
最大
OHpak SB-2002
3.0 5.0 2.0 3 ~ 10 15 ~ 60
OHpak SB-2002.5
OHpak SB-2003
OHpak SB-2004
OHpak SB-2005
OHpak SB-2006
OHpak SB-2006M
OHpak SB-G 8B
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5. 流动相的配制
(1) 流动相请充分脱气防止有气泡。
(2) 流动相中含有不溶的杂质可能会导致色谱柱性能下降和色谱图噪声，因此请使用滤膜(0.45 μm)过滤流动相。
注意 ※使用水时，请使用超纯水装置新配制的水或者刚开封的 HPLC 级蒸馏水。使用有机溶剂时，请使用
HPLC 级以上的试剂。使用品质不同的有机溶剂时，使用前请确认其品质适合分析。开封时间长的
有机溶剂可能有性质改变、吸湿、污染的问题，请不要使用。
※请勿使用已长时间保存的流动相，组成的变化可能导致洗脱行为的变化和色谱柱的劣化。
参考 ※建议使用具有在线脱气功能的脱气机。
6. 样品的配制
(1) 尽量使用流动相溶解和稀释样品。如果难以溶解在流动相中，请尽量和流动相组成接近。
(2) 为了防止由于颗粒物（不溶物）的堵塞导致色谱柱变差，劣化或性能变差，请使用滤膜(0.45 μm)过滤样品。
(3) 分子量 1,000,000 以上的高分子样品，请在流动相中静置半天至一天，使样品充分浸润后小心搅拌使样品完
全溶解。搅拌时要注意避免分子链断裂。
(4) 样品进样量为 250 ~ 1000 μL。
(5) 高分子样品溶液的粘度和分子量及浓度有很大关系。样品溶液的粘度过高会造成峰变宽或延迟洗脱等问题，
影响分子量分布测定。一般来说分子量越大粘度越高，请降低样品浓度。请根据下列表格配制样品溶液。
样品分子量范围
浓度
(w/v)
~ 5,000
1.0 %
以下
5,000
~ 25,000
0.5 %
以下
25,000
~
200,000
0.25 %
以下
200,000
~ 2,000,000
0.1 % 以下
2,000,000
~
0.05 %
以下
注意 ※样品使用非流动相溶剂溶解时，如果含有不溶于流动相的物质，可能会产生进样后堵塞色谱柱的情
况。
参考 ※为了保护分析柱，建议使用保护柱。
7. 色谱柱的使用方法
7-1. 流路中的溶剂置换
安装色谱柱前请先将设备中的流路充分洗净，完全置换成流动相。另外，请切换阀清洗并置换进样器的流路
（进样环）。 置 换不互溶或溶解性低的溶剂时，先使置换成双方溶剂都能互溶的溶剂，再置换成使用溶剂。
注意 ※色谱柱不能使用的溶剂在流路中残留可能会造成色谱柱的劣化。
※流动相组成发生显著变化，可能造成泵、管路中的污垢脱落，可能会造成色谱柱的劣化。
7-2. 色谱柱的连接
(1) 查看色谱柱身标签，然后将色谱柱连接到设备，使流动相沿流动方向（➡）流动。使用保护柱时，请依次先
连接保护柱，再连接分析柱。
(2) 请一边按住配管一边拧紧色谱柱的末端接头，防止配管和末端接头中产生空隙。空隙会造成样品的扩散，
导致色谱峰变宽。
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(3) 将流速设置为 1.0 mL/min 以下然后开始送液。在升温使用色谱柱时，以低流送液直到达到设定温度，然后
逐渐将流速增加到所需流速。
(4) 色谱柱可以串联使用。排阻限分子量不同的色谱柱串联时，请先连接排阻限大的色谱柱。SB-2006M 是为了
优化标准曲线的直线性，使用不同排阻限分子量填料混合填充的色谱柱，和其他系列色谱柱串联使用会破坏
填料混合比例，可能使标准曲线弯曲。需要 SB-2006M 串联使用时，请串联同款 SB-2006M。
警告 ※请检查溶剂是否泄露。否则可能会造成漏电、腐蚀或化学损坏。
注意 ※色谱柱连接到仪器上时，请避免气泡进入色谱柱，否则可能造成色谱柱劣化。
※当连接色谱柱或从停泵状态开始送液时，以 1.0 mL/min 以下流速送液，压力突然升高可能会使色
谱柱劣化。
※升温使用色谱柱后，将流速降低至 1.5 mL/min 以下并保持送液，柱温恢复至室温，然后停泵。否
则洗脱液冷却时发生收缩，在色谱柱内形成空隙可能导致色谱柱劣化。
参考 ※建议设置泵的报警压力，以避免超过最大可用压力。
7-3. 流动相的置换
置换流动相时，请以 1.0 mL/min 以下的流速通液 3 ~ 5 倍的柱体积。
(1) 请事先确认柱中溶剂与要置换的溶剂是否互溶。
(2) 置换成和色谱柱储存溶剂互溶的溶剂时，先置换成储存溶剂和使用溶剂 1:1的混合溶剂，再置换成使用溶剂。
（例） 从缓冲液（或者盐的水溶液）置换成甲醇时，先置换成缓冲液（或者盐的水溶液）和甲醇 1:1 的混合
溶液，再置换成甲醇溶液。
(3) 置换不互溶或溶解性低的溶剂时，先置换成双方溶剂都能互溶的溶剂，再置换成使用溶剂。
（例） 从盐浓度高的缓冲液（或者盐的水溶液）置换成水/乙腈混合溶液时，先置换成水，再置换成水/乙腈
混合溶液。
注意 ※请不要频繁更换流动相组成，可能会造成色谱柱劣化。
7-4. 色谱柱清洗方法
流路或者样品中有不溶物质或者吸附性物质残留在色谱柱内，可能会影响色谱柱的洗脱及压力的变化，这种情况
清洗色谱柱可能有改善效果。
使用保护柱时，请先去除保护柱进行检测，如果效果改善了，则可能是保护柱的原因，请清洗保护柱。
如果去除了保护柱仍然没有改善，请清洗保护柱和分析柱，请注意把保护柱和分析柱分开清洗。另外，几根色谱
柱串联使用时，请分开清洗。清洗色谱柱时，请不要连接检测器，流动相从色谱柱流出后直接流入废液缸即可。
如果清洗色谱柱后仍未改善，请更换新的色谱柱。
【清洗方法】
(1) 如果不溶物堵在色谱柱入口，可以逆接色谱柱并以小于正常流速一半的流速通流动相来将其除去。
(2) 吸附物质的具体清洗方法请参考下面例子。在清洗色谱柱时，请逆接色谱柱。请使用 1.5 mL/min 以下的流
速，通液量建议为 5 ~ 10 倍柱体积。
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（清洗例 1） 疏水性物质的清洗 （使用水相流动相时）
添加乙腈、甲醇等极性有机溶剂通液。
（清洗例 2） 离子性物质的清洗
增加盐浓度通液。
注意 ※极性有机溶剂和盐浓度的添加范围，请参照第 4-2 节“可使用溶剂”。
※洗净液长时间保留在色谱柱中可能会造成色谱柱提前劣化，色谱柱清洗后请尽快更换成流动相。
8. 色谱柱的保存
置换成出厂时的储存溶剂，从装置中卸下色谱柱并拧紧两端堵头，在温度变化小的阴凉处储存。关于置换流动相，
请参照第 7-3 节 "流动相的置换"。
注意 ※色谱柱内绝对不能干燥，否则可能导致色谱柱劣化。
9. 色谱柱的检定方法
检定方法请参照产品的出厂检测报告(CERTIFICATE OF ANALYSIS)。Shodex采用「半峰宽法」测定理论塔板
数，采用非对称系数(FAS)作为峰对称性指标。详细的检定方法请参照Shodex官方网站。
参照链接 https://www.shodex.com/cn/da/07.html
注意 ※理论塔板数和 FAS 根据样品及分析条件的变化会有较大差异。在检定色谱柱出厂性能的时候，
请根据 CERTIFICATE OF ANALYSIS 记载的条件进行测试。
10. 其它注意事项
(1) 请勿拧开色谱柱的末端螺丝。
(2) 请勿对色谱柱施加敲击，掉落等强烈冲击。
(3) 请按照各地废弃物标准正确废弃旧的产品。
产品相关的应用实例，请参考 Shodex 官方网站(https://www.shodex.com/)。如果还有其他问题，请联系购买的
经销商或者通过 Shodex 官方网站的[联系我们]进行咨询。
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Shodex SB-2002.5 (OHpak) 取扱説明書
- タイプ
- 取扱説明書